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核酸提取系列 深加工食品 DNA 提取试剂盒

发布时间:2022-04-21      点击次数:154

简介

深加工食品基因组提取试剂盒适合于从各种食品样品中快速提取高纯度的植物 DNA。本 试剂盒采用硅胶柱纯化技术和经典的 CTAB/氯仿抽提技术,获得的核酸可直接用于 PCR、 Sorthern 杂交/Northern 杂交,以及 LAMP 等下游实验。本试剂盒提供两个流程,请根据下游 应用和样品特点选择合适的流程。


原理

本试剂盒采用的硅胶柱以高结合力的玻璃纤维滤膜为基质。滤膜在高浓度离子化剂(如 盐酸胍或异硫氰酸胍)条件下,可通过氢键和静电等物理化学作用吸附核酸,而蛋白质和其 它杂质则不被吸附而去除。吸附了核酸的滤膜经洗涤去除残留的蛋白质和盐,最后可以用DEPC 处理水洗脱滤膜上吸附的核酸,得到的核酸纯度高,可直接用于各种下游实验。 本试剂盒基于硅胶柱纯化方式。样品在裂解液中裂解,DNA 释放到裂解液中。用氯仿 抽提去除多糖、蛋白质等杂质,得到上清液并加入结合液,转移到柱子中过滤,DNA 被吸 附在硅胶柱的膜上,而蛋白质则不被吸附而去除。后经洗涤液洗涤去除盐分,最后 DNA 被 无核酸酶洗脱液洗脱。


产品组成

组分含量
管 A50 个
管 B50 个
Buffer PTL550mL
Buffer GXP60mL
Buffer GW2*20mL
Proteinase K* 50mg
Protease Dissolve Buffer*5mL
Elution Buffer20mL
说明书1 份

Buffer GW2 在初次使用前加入 80mL无水乙醇,并于室温保存。

Proteinase K 干粉初次使用前加入 2.5mL Protease Dissolve Buffer(终浓度为20mg/mL), 颠倒混匀使蛋白酶 K 充分溶解,于-20℃保存。

保质期

深加工食品DNA 提取试剂盒除Proteinase K 外,可在室温下(15-25℃)干燥保存 18 个月。 Proteinase K 干粉室温运输,收到产品保存于 2-8℃。Buffer PTL 和 Buffer GXP 在低温贮藏中 可能会有沉淀析出,60℃水浴 30 分钟使之溶解。


方案 1. 食品 DNA 小量提取(200mg)

该方案适合于从 200mg 食品样品中提取总 DNA。

准备材料和工具

无水乙醇(96-100%)

氯仿  1.5mL离心管

2mL 离心管

小型离心机(≤14,000 xg)

65℃水浴锅或金属浴


操作流程

1. 用合适的方法匀浆食品样品,转移 200mg 匀浆好的样品至 2mL 离心管中。

2. 加入 1mLBuffer PTL 和 10µL Proteinase K(20mg/ml)至样品中,涡旋让样品充分混匀。65ºC 振荡消化 30~60 分钟。 (若样品含有较多淀粉类物质,加倍Buffer PTL 用量以确保样品完全被 Buffer PTL 浸泡。)

3. 冰浴 3~5 分钟让样品恢复至室温,14,000xg 离心 5 分钟。

4. 在 2mL离心管中预先加入 0.6mL 氯仿。 5. 小心转移上清液(0.6~0.7mL)至装有氯仿的离心管中。涡旋混匀 15 秒。 (若上清液体积小于 500µL,可多处理几管样品,在这一步将上清液合并在一起,混匀后再转移 0.5~0.7mL至氯仿中。)

6. 14,000xg 离心 10 分钟。

7. 小心转移 500µL 上清液至新的离心管中。加入 500µL Buffer GXP 至上清液中,涡旋混匀 15 秒。

8. [可选,若回收小于 100bp 的 DNA 片段] 加 500µL 无水乙醇至混合液中,涡旋混匀 15 秒。 (若样品富含色素和多糖类物质,加入乙醇可能会引起色素/多糖的沉淀而影响核酸的纯度。)

9. 把管 A 装在管 B 中。转移混合液(700µL)至管 A 中。8,000xg 离心 30~60 秒。

10. (若混合液超过 700µL) 倒弃管 B 中的滤液,把管 A 装回管 B 中。把剩余混合液转移 至管 A 中。8,000xg 离心 30~60 秒。

11. 倒弃管 B 中的滤液,把管 A 装回管 B 中。加入 600µL Buffer GW2(已用无水乙醇稀释) 至管 A 中。8,000xg 离心 30~60 秒。Buffer GW2 在使用之前须用无水乙醇进行稀释。 按瓶子标签指示进行稀释。 12. 倒弃管 B 中的滤液,把管 A 装回管 B 中。加入 600µL Buffer GW2(已用无水乙醇稀释) 至管 A 中。8,000xg 离心 30~60 秒。

13. 倒弃管 B 中的滤液,把管 A 装回管 B 中。13,000xg 离心 3 分钟去除管 A 中残留的乙 醇。

14. 将管 A 转移至新的 1.5mL离心管中。加入 50µL Elution Buffer 至管 A 的膜中央。室温 静置 3 分钟。13,000xg 离心 1 分钟。

15. 丢弃 DNA 结合柱,把 DNA 保存于-20℃。


方案 2. 食品 DNA 提取(2g)

该方案适合于从 2g 食品样品中提取总 DNA。

需要准备的材料和工具

无水乙醇(96-100%)

氯仿  1.5mL 离心管

2mL 离心管

50mL离心管

大型离心机(3,000xg)

小型离心机(≤14,000xg)

65℃水浴锅或金属浴


操作流程


1. 用合适的方法匀浆食品样品,转移 2g 匀浆好的食品样品至 50mL 离心管中。

2. 加入10mL Buffer PTL和40µL Proteinase K(20mg/mL)至样品中,涡旋让样品充分混匀。65ºC 振荡消化 30~60 分钟。 (若样品含有较多淀粉类物质,加倍 Buffer PTL 用量以确保样品完全被Buffer PTL 浸泡。)

3. 冰上放置 3~5 分钟。3,000~4,000xg 离心 5 分钟。

4. 在 2mL 离心管中预先加入 0.8mL 氯仿。

5. 转移 0.75~0.8mL上清液至装有氯仿的离心管中。涡旋混匀 15 秒,14,000xg 离心 15 分钟。

6. 小心转移 700µL 上清液至新的离心管中。加入 700µL Buffer GXP 至上清液中,涡旋混匀 15 秒。

7. [可选,若回收小于 100bp 的 DNA 片段] 加入 700µL 无水乙醇至混合液中,涡旋混匀 15 秒。 (若样品富含色素和多糖类物质,加入乙醇可能会引起色素/多糖的沉淀而影响核酸的纯度。)

8. 把管 A 装在管 B 中。转移混合液(700µL)至管 A 中。8,000xg 离心 30~60 秒。

9. (若混合液超过 700µL) 倒弃管 B 中的滤液,把管 A 装回管 B 中。把剩余混合液转移至 管 A 中。8,000xg 离心 30~60 秒。

10. 倒弃管 B 中的滤液,把管 A 装回管 B 中。加入 600µL Buffer GW2(已用无水乙醇稀释) 至管 A 中。8,000xg 离心 30~60 秒。

11. 倒弃管 B 中的滤液,把管 A 装回管 B 中。加入 600µL Buffer GW2(已用无水乙醇稀释) 至管 A 中。8,000xg 离心 30~60 秒。

12. 倒弃管 B 中的滤液,把管 A 装回管 B 中。13,000xg 离心 3 分钟去除管 A 中残留的乙醇。

13. 将管 A 转移至新的 1.5mL 离心管中。加入 50µL Elution Buffer 至管 A 的膜中央。室温 静置 3 分钟。13,000xg 离心 1 分钟。

14. 丢弃 DNA 结合柱,把 DNA 保存于-20℃。

常见问题解答

该列表可能有利于您解决在提取过程中所碰到的问题。若您对试剂盒存在疑问或有良好的建 议,又或者您在分子生物学实验中碰到问题,都请您联系我们。我们将竭尽所能为您排扰解难。


现 象 原 因 解 决 方 法 柱子堵塞 转移上清液时带有太 多沉淀 在下一次提取过程中,转移上清液时不要吸到沉 淀物。若吸到沉淀物,可把上清液再离心一次。 裂解液非常粘稠 某些食品样品中含有丰富的粘液和高分子多糖, 会让裂解液变得非常粘稠。减少样品用量或加入 Buffer PTL 的用量。 离心速度太低 提高离心速度或延长离心时间。 加入氯仿后,混匀不 够 在下次制备时,加入氯仿时一定要剧烈振荡混匀。 DNA 产量低 样品匀浆不充分 充分研磨样品,将样品研磨成细小的粉末状。 样品裂解不充分 适当延长裂解时间,加入 Buffer PTL 后,让样品 充分分散。 Proteinase K 用量不 足 对肉类源性的食品,加大蛋白酶用量以提高消化 效果 结合条件不正确 计算上清液体积,加入适量的 Buffer GXP 和乙 醇。 洗脱效率不够 洗脱时 Elution Buffer 预热至 65℃,并加到膜中 央,室温放置 3 分钟。 Buffer GW2 中乙醇没 有加入或加入量不够 按说明书或瓶子标签所示,加入正确的乙醇。 柱子没有空甩 柱子必须空甩 2-3 分钟以去除膜上残留的乙醇。 若以上的解答还是无法解决您的问题,请您联系我们。


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