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MN9D小鼠中脑多巴胺能神经元细胞培养操作步骤

发布时间:2022-05-07      点击次数:225
MN9D小鼠中脑多巴胺能神经元细胞别名:MN9D细胞,小鼠中脑多巴胺能神经元细胞,培养环境:空气,95%; 二氧化碳 (CO2),5%。
细胞培养操作步骤:
1.吸走多余培养基,加入3-5mL PBS后轻轻晃动培养瓶润洗细胞;
2.吸干净PBS后
加入1mL 0.25%胰-酶-0.53mM EDTA,轻轻摇晃培养皿使胰-酶浸没细胞表面,培养瓶放37度培养箱消化;
(细胞对于消化比较敏感,消化过度会严重影响细胞状态,导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落,可以轻轻吹下时即可终止,禁止消化到细胞完全漂浮。混匀细胞时尽量轻柔,不要吹出大量气泡。)
3.加入6-8ml完全培养基终止消化,轻轻吹下细胞混匀;
4.将混匀的细胞1000rpm(约150g)离心3min,弃上清,再用新鲜培养基重悬37度培养箱继续培养;
传代比例: 不同细胞生长速度不一,具体传代比例视细胞生长速度而定,大部分细胞适用1:3-1:4传代,生长较慢的细胞可以1:2传代。
注意事项:不同品牌胰-酶消化时间差别较大,注意严格控制消化时间消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响细胞状态。
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