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荧光PCR如何实现实时监控的呢?

更新时间:2022-10-13      点击次数:782
PCR可以被认为是与发生在细胞内的DNA复制过程相似的技术,其结果都是以原来的DNA为模板产生新的互补DNA片段。细胞中DNA的复制是一个非常复杂的过程。参与复制的有多种因素。PCR是在试管中进行的DNA复制反应,基本原理与细胞内DNA复制相似,但反应体系相对较简单。
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:
①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;
②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在Taq酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。
重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链",而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
荧光PCR如何实现实时监控的呢?
1、PCR反应体系中加入荧光染料。
2、所有的定量PCR仪器都有三个共同的组成部分(检测器、激发光源、热循环模块)。
3、在扩增过程中,荧光信号随着PCR产物的增加而增强。
4、每个循环结束后,定量PCR仪器通过光学系统记录荧光信号的增加。
5、PCR软件计算出数据,用于实验结果的分析ARMS检测方法;1个SNP位点设计双管反应,含目的基因检测及内参检测双通道。
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