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浅述γ干扰素ELISA检测试剂盒使用的基本原理

发布时间:2022-11-02      点击次数:149
  γ干扰素ELISA检测试剂盒采用双抗体夹心ELISA法,检测释放至血浆中的γ-干扰素,根据γ-干扰素水平判断被检牛是否感染过牛分枝杆菌。检测准确:预先包被的抗体是IFNγ单克隆抗体。检测相抗体也是IFNγ单克隆抗体,并经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人IFNγ呈正相关。
  γ干扰素ELISA检测试剂盒使用的基本原理有:
  1. 抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,或是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫学活性;
  2. 抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;
  3. 酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。
  γ干扰素ELISA检测试剂盒的使用注意事项有哪些?
  实验开始前,各试剂均应平衡至室温;试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物请避光保存。
  试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡十五到三十分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
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