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荧光PCR试剂盒在保存方面有什么需要注意的

更新时间:2023-11-07      点击次数:459
PCR可以被认为是与发生在细胞内的DNA复制过程相似的技术,其结果都是以原来的DNA为模板产生新的互补DNA片段。细胞中DNA的复制是一个非常复杂的过程。参与复制的有多种因素。PCR是在试管中进行的DNA复制反应,基本原理与细胞内DNA复制相似,但反应体系相对较简单。
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:
①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备。
②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在Taq酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。
重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链",而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟, 2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
注意事项:
1.所有操作严格按照说明书进行。
2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化,混匀并短暂离心。
3.反应液应避光保存。
4.反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧。
5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服。
6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染。
7.实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器。
8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
 
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