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原代内膜细胞培养过程中会碰到哪些细胞贴壁障碍

更新时间:2025-07-28点击次数:175
原代内膜细胞培养体系是一个为体外生长的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳动物器官中的内膜细胞设计的理想的完培方案。本体系是一个基于碳酸氢盐的缓冲体系,可以在孵育的5%的CO2的气体环境下维持一个围绕pH7.2的酸碱缓冲体系。本体系是一个无菌的液体混合系统,其中包含必须和非必须氨基酸、维生素、激素、生长因子、微量元素和一些其他的有机和无机化合物以及胎牛血清(10%)。本培养体系是基于固定配方配制的液态培养体系,可以为体外培养的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳动物器官中的内膜细胞提供一个确定适宜的平衡营养环境,并且可以选择性的促进内膜细胞的扩增。
细胞贴壁障碍:
‌贴壁率低或漂浮‌
原因‌:
消化过度(胰酶浓度过高或时间过长)损伤细胞表面蛋白‌;
培养器皿未包被或包被不当,缺乏细胞外基质支持‌;
血清浓度不足(<5%)或贴壁因子缺失‌;
操作温度过低导致细胞收缩脱落‌。
‌解决‌:
改用低浓度胰酶(0.04%-0.05%)并严格控制消化时间‌;
使用胶原蛋白(0.1%)、明胶或纤连蛋白包被培养皿‌;
血清浓度提升至5%-10%(需根据细胞类型调整)‌;
预热培养基至37℃,操作环境维持25℃以上‌。
‌传代后贴壁失败‌:
‌原因‌:
传代比例过大(如1:4以上),细胞密度过低无法分泌足够基质‌;
残留消化酶损伤或诱导凋亡‌。
‌解决‌:
控制传代比例为1:2至1:3,接种后24小时内静置培养‌;
中和胰酶(推荐无血清胰酶抑制剂)‌。
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