原代小梁网细胞培养体系有哪些优化方法

更新时间：2026-01-21

点击次数：25

原代小梁网细胞培养体系是一个为体外生长的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳动物的小梁网细胞设计的理想的完培方案。本体系是一个基于碳酸氢盐的缓冲体系，可以在孵育的5%的CO2的气体环境下维持一个围绕pH7.2的酸碱缓冲体系。本体系是一个无菌的液体混合系统，其中包含必须和非必须氨基酸、维生素、激素、生长因子、微量元素和一些其他的有机和无机化合物以及胎牛血清（10%）。

原代小梁网细胞培养体系有哪些优化方法：

无菌操作与污染防控：

‌严格执行无菌操作‌：所有操作在生物安全柜内进行，使用前用70%乙醇擦拭台面，定期紫外线消毒培养室。

‌合理使用抗生素‌：添加‌青霉素/链霉素‌或‌庆大霉素‌防止细菌污染，但避免长期使用以防细胞毒性。对于真菌污染，可考虑添加两性霉素B。

‌定期检测支原体‌：使用PCR等方法定期检测，确保培养物纯净。

基质与培养器皿优化：

‌包被培养表面‌：使用‌明胶、多聚赖氨酸（PLL）或胶原蛋白‌包被培养瓶/皿，增强细胞贴壁性。例如，胶原包被对小梁网细胞贴壁有益。

‌选择合适培养器皿‌：生长较慢的细胞（如原代小梁网细胞）建议使用‌透气性好的塑料培养瓶‌，利于气体交换。

细胞状态监测与质量控制

‌定期观察形态‌：使用倒置显微镜观察细胞是否保持典型的“铺路石”样或成纤维细胞样形态，及时更换老化细胞。

‌检测细胞活力‌：通过台盼蓝染色检测细胞存活率（应≥90%）。

‌评估代谢活性‌：使用MTT法等评估细胞代谢活性。