细胞专用培养基是为特定细胞类型量身定制的培养环境,能够提供该细胞生长所需的特定营养成分、生长因子和适宜的pH与渗透压条件,从而确保细胞保持最佳增殖状态和功能特性。
如何预防细胞污染:
构建无菌环境:
细胞房与超净台管理
实验前开启紫外灯照射30–60分钟,杀灭空气和台面微生物。
操作前用75%酒精擦拭超净台台面、侧壁及仪器表面,确保无菌操作区洁净。
保持气流稳定,避免频繁进出或手臂跨越无菌区域,防止扰动气流引入污染。
培养箱与辅助设备维护
每周清洁培养箱内壁,使用75%酒精或过氧化氢擦拭,防止霉菌滋生。
增湿盘添加无菌去离子水,并定期更换,可加入真菌抑制剂预防污染。
显微镜、离心机等共用设备使用前后均需酒精消毒,避免交叉污染。
空间消毒策略
定期采用甲醛熏蒸或过氧化氢干雾灭菌对整个细胞房进行深度消毒,尤其适用于顽固污染处理。
空气沉降菌检测每周至少一次,确保空气质量符合细胞培养标准。
规范实验操作:
人员防护与无菌意识
进入细胞间需穿戴无菌实验服、口罩、手套和鞋套,必要时佩戴帽子。
操作前用75%酒精消毒双手,避免触碰非无菌物品(如手机、门把手)。
手套破损立即更换,不同细胞操作间建议更换新手套或酒精搓手。
无菌操作要点
所有开盖操作在酒精灯火焰附近进行,瓶口、管口需短暂过火灭菌。
移液枪头、吸管等耗材专管专用,严禁混用,防止交叉污染。
动作轻柔,避免剧烈晃动引起空气流动,减少污染机会。
细胞处理规范
换液时倾斜培养瓶,沿壁缓慢加入新鲜培养基,减少对细胞的物理冲击。
传代消化过程中,胰酶使用后不再重复利用,剩余液体直接丢弃。
离心后开盖前用酒精擦拭离心管外壁,防止残留液滴造成污染。