人类白细胞抗原ELISA试剂盒是一种基于酶联免疫吸附测定(ELISA)技术的体外检测试剂盒,主要用于定量或定性检测人血清、血浆、细胞培养上清液等生物样本中特定HLA分子(如HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E等)的浓度。HLA是人类主要组织相容性复合体(MHC)的编码产物,位于第6号染色体短臂,广泛参与免疫识别、抗原呈递及移植排斥反应,在器官y植配型、自身免疫疾病研究和肿瘤免疫等领域具有重要意义。
该试剂盒通常采用双抗体夹心法原理:微孔板预先包被特异性抗HLA抗体作为捕获抗体;加入待测样本后,HLA抗原与固相抗体结合;再加入生物素标记的检测抗体,形成“抗体-抗原-检测抗体”复合物;随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素,通过酶催化底物显色,颜色深浅与样本中HLA含量成正比,最终通过酶标仪测定吸光度并计算浓度。
一、整体保存原则(必记)
核心温度:2~8℃冷藏(冰箱冷藏室),严禁冷冻(-20℃),否则酶、抗体变性失活,包被板脱落。
全程避光、干燥、密封,远离热源与阳光直射。
竖直放置,防止液体渗漏、交叉污染。
有效期:未开封6–12个月(见盒签);开封后1–3个月内用完。
二、未开封试剂盒(整套)
存放:2~8℃、避光、干燥、密封原包装。
环境:湿度<60%,远离冰箱门/制冷风口(减少温度波动)。
禁止:不可冷冻、不可室温久放、不可暴晒。
三、开封后各组分保存(关键)
1.酶标板(96孔板)
未用完板条:连同干燥剂→铝箔袋密封→2~8℃保存。
有效期:开封后≤1个月,受潮易长菌、影响结合效率。
禁止:冷冻、敞口、潮湿环境。
2.标准品(冻干/液体)
冻干标准品:2~8℃密封保存;复溶后分装成小份→-20℃冷冻,避免反复冻融。
液体标准品:2~8℃,开封后1周内用完。
3.酶结合物(HRP标记抗体)
保存:2~8℃避光(棕色瓶或铝箔包裹)。
长期不用:分装后-20℃冷冻,反复冻融≤2次。
风险:光/热易致酶活性下降、背景升高。
4.显色底物(TMB)
保存:2~8℃严格避光(棕色瓶、铝箔包裹、避光盒)。
有效期:开封后1周内用完,变蓝即失效。
禁止:冷冻、光照、接触金属。
5.浓缩洗涤液(20×)
保存:2~8℃或室温(15–25℃),密封防污染。
低温结晶:37℃水浴溶解,不影响效果。
稀释后:2~8℃保存,3天内用完。
6.终止液(稀硫酸)
保存:2~8℃密封,防挥发、防腐蚀。
安全:单独存放,避免与酶/抗体接触。
四、绝对禁忌(易踩坑)
严禁冷冻试剂盒整体及酶标板(蛋白变性、包被脱落)。
避免反复冻融标准品/酶结合物(活性断崖式下降)。
TMB底物绝对避光(光氧化→显色异常、假阳性)。
开封后不密封/不加干燥剂(受潮长菌、板条失效)。
温度波动大(冰箱门频繁开关、靠近风口)。
五、快速记忆口诀
2–8℃冷藏不冻,避光干燥密封好;
板条干燥剂封袋,标准品分装防融;
TMB避光别冷冻,洗涤液结晶37溶。
