人纤溶酶原激活剂ELISA试剂盒是一种基于酶联免疫吸附测定(ELISA)原理的高灵敏度生物检测产品,主要用于定量检测血清、血浆、细胞培养上清液等样本中人纤溶酶原激活剂的浓度。纤溶酶原激活剂主要包括组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-PA),它们在调节体内纤维蛋白溶解系统、维持血管通畅以及参与肿瘤转移、血栓形成等生理病理过程中发挥关键作用。
该试剂盒通常采用双抗体夹心法进行检测。其核心组件包括预包被抗人纤溶酶原激活剂特异性抗体的微孔板、生物素标记的检测抗体、辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素、显色底物(如TMB)及标准品等。操作步骤简便:将待测样本加入孔中,与包被抗体结合后洗涤,再加入生物素化抗体复合物,随后加入HRP标记的亲和素,最后加入显色底物,通过酶标仪在450nm波长下读取吸光度值(OD值)。根据标准曲线计算出样本中目标蛋白的浓度。
一、整套试剂盒未开封(原装)通用标准
常规短期储存(1–6个月,常规使用)
整套试剂盒统一2~8℃冰箱避光冷藏,严禁冷冻、室温长期放置
有效期:外包装标注6个月,全程2–8℃可完整保存至保质期结束。
存放位置:冰箱中层,远离冰箱出风口、门架,防止局部低温结冰损伤试剂;避光存放,TMB显色液对光照极敏感。
长期暂存(超过1个月不用,长期闲置)
取出标准品、浓缩生物素抗体、HRP酶结合物三类蛋白敏感组分,分装后-20℃避光冻存;剩余液体(洗涤液、稀释液、终止液、包被板)维持2–8℃冷藏,整套避光密封。
-20℃冻存条件下,蛋白组分可稳定保存12个月,全程避免反复冻融。
运输临时存放
到货后立刻转入2–8℃冷藏,不可室温放置超2小时;夏季快递到货优先冰浴降温再入冰箱。
t-PA ELISA试剂盒外包装储存标注
二、分组分单独保存(开封后重点)
1.可拆卸预包被酶标板(核心,严禁冷冻)
已拆未用完板条:立刻放回原铝箔袋,放入配套干燥剂,封口夹密封,2~8℃避光,最多存放30天
禁止:-20℃冷冻,冰晶会破坏固相包被抗体,造成信号大幅下降、曲线失效。
防潮要点:铝袋破损更换全新自封袋+新干燥剂,防止板条吸潮长菌。
2.标准品(液态蛋白,最易失活)
未复溶冻干标准品:2–8℃冷藏;长期不用分装-20℃避光。
复溶后标准品:单次使用剩余液体分10–20μL无菌EP管分装,-20℃避光冻存;2–8℃仅可短期存放1周,不可长期冷藏。
红线:杜绝反复冻融,冻融≥3次蛋白降解,灵敏度显著降低。
3.生物素化抗体、HRP酶结合物(浓缩液)
未稀释原液:2–8℃避光;长期闲置分装-20℃避光。
稀释后的工作液:现配现用,不可留存过夜,配完当日用完。
避光要求:棕色瓶存放,外层包裹铝箔遮光,HRP遇光快速失活。
4.TMB显色液(光敏感)
全程2–8℃避光,铝箔包裹棕色瓶;一旦变蓝、浑浊直接报废,严禁冷冻、暴晒、室温久放。
5.终止液、浓缩洗涤液、各类稀释液(稳定性高)
常规:2–8℃冷藏,开封拧紧瓶盖防挥发,可存放至试剂盒有效期。
浓缩洗涤液低温出现白色结晶:30–37℃水浴溶解,冷却后正常使用,不影响检测结果。
终止液含弱酸,密封防止腐蚀瓶盖、挥发。
6.封板膜、说明书、干燥剂
室温干燥避光存放即可,无需冷藏。
三、开封后分场景保存细则
1周内全部用完
所有试剂统一2–8℃避光,每次取用快速操作,减少室温暴露时间,用完立刻放回冰箱。
1个月内分次使用
酶标板:密封+干燥剂2–8℃;
标准品、酶结合物、浓缩抗体:分装-20℃冻存,每次取1管解冻即用,其余继续冷冻;
显色液、终止液、洗涤液:持续2–8℃避光。
超过3个月不使用
全部蛋白敏感组分分装-20℃避光;包被板密封冷藏;整套外包装裹铝箔避光。
四、关键禁止操作(失效高发诱因)
严禁将整套试剂盒放入-20℃冷冻,尤其酶标板冷冻直接报废;
标准品、酶结合物禁止反复冻融,分装是唯1解决方案;
TMB显色液不可光照、高温,出现淡蓝色即失效;
所有瓶盖必须拧紧,防止水分挥发、交叉污染;
不可放置冰箱门、制冷风口,局部结冰会损伤蛋白;
试剂盒不可高温环境(>30℃)放置超过30分钟。
五、短期取用平衡操作
每次实验前,将需要的试剂从冰箱取出,室温平衡20–30分钟再操作;实验结束全部试剂及时归位冷藏/冷冻,不要隔夜放置室温。
六、配套待测样本同步储存参考(补充)
血清/血浆t-PA样本短期2–8℃可存24h;长期分装-20℃冻存,避免反复冻融,不超过3个月。
