人纤溶酶原激活剂ELISA试剂盒是一种基于高特异性酶联免疫吸附测定技术的高灵敏度生物检测工具，主要用于定量检测血清、血浆、细胞培养上清液等样本中的人组织型纤溶酶原激活剂的浓度。t-PA是人体内关键的纤维蛋白溶解系统核心成分，由血管内皮细胞分泌，负责将纤溶酶原转化为纤溶酶，进而降解血栓中的纤维蛋白，在维持血液流动性和预防心脑血管疾病中发挥至关重要的作用。
该试剂盒通常采用双抗体夹心法原理进行设计。其核心组件包括预先包被在微孔板上的抗人t-PA单克隆抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人t-PA单克隆抗体以及高纯度的t-PA标准品。检测时，样本中的t-PA与固相抗体结合，再加入酶标抗体形成“抗体-t-PA-酶标抗体”复合物。经过严格洗涤去除未结合物质后，加入底物显色体系，溶液颜色的深浅与样本中t-PA的浓度呈正比关系。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度值（OD值），利用标准曲线即可精确计算出待测样本中t-PA的含量。
一、试剂盒储存与试剂准备事项
整体储存
整套试剂盒2～8℃避光冷藏；严禁冷冻包被板、TMB显色液、酶结合物，冻融直接失效。
试剂平衡
所有试剂取出后室温（20～25℃）平衡≥30min再开始实验；浓缩洗涤液低温出现结晶属正常，37℃水浴完q溶解后再稀释。
试剂配制硬性规则
浓缩洗涤液只用去离子水/蒸馏水稀释，不可自来水；稀释后1×洗涤液2～8℃可存放1个月。
生物素抗体工作液、链霉亲和素-HRP工作液现配现用，当日剩余全部丢弃，不可留存。
TMB显色液避光保存；使用前应为无色/极淡蓝色，若自发变蓝、浑浊，直接报废。
未用完板条处理
不用的条板立即放回铝箔袋，放入干燥剂，密封严实2～8℃保存，建议1个月内用完；板条一旦干燥，抗体不可逆失活。
严禁混用
不同批号、不同品牌试剂盒试剂禁止互换；超过有效期禁止使用。
二、样本采集、前处理（t-PA重点！极易踩坑）
1.血液样本要求
1）血浆优先推荐3.2%柠檬酸钠抗凝（血：抗凝剂=9:1）；
EDTA、肝素血浆部分试剂盒存在基质干扰，使用前务必参考说明书验证；不推荐血清（凝血过程大量释放t-PA，结果严重偏高）。
2）采血要点
止血带捆扎时间尽量＜1min，长时间压迫血管内皮释放t-PA，数值假性升高；
采血顺利，避免溶血、凝块；溶血、严重脂血样本舍弃。
3）分离流程（尽量冰上操作）
采血后30min内1000～1500×g离心15min；吸取上层血浆，建议二次离心去除血小板（乏血小板血浆），血小板活化会持续释放t-PA。
4）样本保存
新鲜样本尽快检测；分装冻存-20℃短期、-80℃长期；严格避免反复冻融（≤2次）。
2.其他样本
细胞上清、组织匀浆：匀浆全程冰浴，推荐添加蛋白酶抑制剂；离心去除细胞碎片，上清待测；浑浊样本务必再次澄清。
重要干扰：体内PAI-1（纤溶酶原激活物抑制物）可结合t-PA，若检测活性t-PA与总t-PA抗原前处理方案不一样，请区分试剂盒检测指标。
三、实验全程操作规范
加样要求
标准品、样本、每种试剂更换新吸头，杜绝交叉污染；
液体加到孔底，不要贴孔壁、减少气泡；气泡会造成OD值偏差；
建议标准品、待测样本全部设置复孔；每次实验必须同步做标准曲线，不能沿用旧曲线。
孵育控制（影响重复性）
温育全程加盖配套封板膜，防止液体蒸发、孔内干涸；酶标板干燥直接报废整板数据；
37℃恒温箱温度稳定，避免开门频繁；孵育计时从最后一孔加样完毕开始。
洗板步骤（ELISA成败核心）
每孔洗涤液≥300μL，每次浸泡30～60s；
手工洗板：甩净液体后，在干净吸水纸上充分拍干；不要擦拭孔底部；
洗涤不足：背景升高、假阳性；洗涤过度：信号偏低、CV变大。
显色操作
加入TMB后避光孵育；严格统一所有孔显色时长；颜色深浅差异较大时，可提前终止，不建议无限延长。
终止与读数
加入终止液轻轻震荡混匀；终止后30分钟内，450nm读取OD值；有条件选用600～650nm作为参比波长扣除背景。
四、浓度超标样本处理
样品OD高于标准曲线最高点：不能直接外推计算！
用试剂盒自带样品稀释液进行梯度稀释复测，稀释后结果乘以稀释倍数；禁止使用PBS、生理盐水稀释（基质效应造成误差）。
五、安全与废弃物
样本视为生物危险源，全程佩戴手套；
终止液多为稀硫酸，避免皮肤接触；
废液可加入次氯酸钠至终浓度1%，静置30min灭活后处理。
服务热线：15021281375
更新时间：2026-07-15
点击次数：5
当前位置：
扫码加微信