原代小梁网细胞培养体系的纯度提升

本体系是一个无菌的液体混合系统，其中包含必须和非必须氨基酸、维生素、激素、生长因子、微量元素和一些其他的有机和无机化合物以及胎牛血清（10%）。本培养体系是基于固定配方配制的液态培养体系，可以为体外培养的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳动物的小梁网细胞提供一个确定适宜的平衡营养环境，并且可以选择性的促进小梁网细胞的扩增。

纯度提升优化：

差速贴壁纯化法‌：将消化后的细胞悬液先接种到普通塑料培养皿中，37℃孵育2小时后，成纤维细胞会优先贴壁，此时收集未贴壁的细胞悬液，转移到明胶包被的培养皿中继续培养，可去除90%以上的成纤维细胞污染。

‌选择性培养基筛选‌：在培养基中添加100μg/mL的G418，处理24小时，内皮细胞对该浓度的抗生素敏感性远高于小梁网细胞，可选择性清除混杂的血管内皮细胞，进一步提升细胞纯度。

‌定期标志物鉴定‌：每传代2次就通过免疫荧光染色检测层黏连蛋白、纤维连接蛋白等小梁网特征标志物，同时排除CD31内皮标志物阳性的杂细胞，确保细胞纯度≥95%。

注意事项：

组织取材必须在供体死亡6小时内完成，超过12小时的眼球样本几乎无法成功分离出活性合格的原代小梁网细胞。

消化过程严格控制酶解时间，胶原酶消化超过3小时会导致细胞活性大幅下降，后续贴壁效率不足30%。

传代次数严格控制在P4代以内，超过P5代的细胞会出现明显的表型丢失，失去原代小梁网细胞的房水调控功能，实验数据可靠性大幅降低。