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猪细小病毒(PPV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

简要描述:猪细小病毒(PPV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)适用于检测肠系膜淋巴结、肝脏、肾、肺、肝、脑、睾丸、胎盘的肺和淋巴结、全血等样本中的猪细小病毒,用于猪细小病毒感染的辅助诊断。

  • 更新时间:2023-12-01
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:544

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10053P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
英文名称Porcine Parvovirus Detection Kit (Real-Time PCR Me保存条件-20℃±5℃,避光保存
有效期12个月试剂盒说明不同批号的试剂盒组分不可交互使用
标本运输采用 2~8℃冰袋运输

猪细小病毒(PPV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)


通用名称:猪细小病毒(PPV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

Name :Porcine Parvovirus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包装规格】50T/盒

【预期用途】

猪细小病毒(Porcine parvovirus, PPV)是引起母猪流产和新生仔猪死亡的主要病原体之一,同时也能引起某些皮肤病和腹泻[1-2],严重影响猪群的健康和正常生产,己经给世界养猪业造成了很大的经济损失。本病主要表现为流产、产死胎和木乃伊胎,母猪通常不表现临床症状。实时荧光定量 PCR 将常规 PCR 技术与荧光检测相结合,不仅具有敏感性高、特异性强、用时短等优点,而且通过分析软件对数据进行分析整理,结果更为准确直观, 已成为病原体检测的重要方法[3]。

本试剂盒适用于检测肠系膜淋巴结、肝脏、肾、肺、肝、脑、睾丸、胎盘的肺和淋巴结、全血等样本中的猪细小病毒,用于猪细小病毒感染的辅助诊断。

【检验原理】

本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术,设计一对猪细小病毒特异性引物,结合一条特异性探针, 用荧光 PCR 技术对猪细小病毒的 DNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

包装规格

50T/盒

PPV 反应液

500μL×2 管

酶液

50μL×1   管

PPV 阳性质控品

50μL ×1 管

阴性质控品

250μL   ×1 管

说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

疑似感染仔猪取肠系膜淋巴结或肝脏;流产或死胎的肾、肺、肝、脑、睾丸和胎盘肺、淋巴结等组织;待检   活猪,用注射器取血 5mL

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输, 严禁反复冻融。

【使用方法】

1.  样品处理(样本处理区)

1.1  样本前处理

组织样品:每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g,手术/剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中;全血样本:待血凝固后,取血清 100μL 于灭菌离心管中。

1.2  核酸提取

推荐采用公司生产的 DNA/提取试剂盒(离心柱提取法),请按照试剂盒说明书进行操

作。

2.  试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;反应管数每满 10 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

试剂

PPV 反应液

酶液

用量(样本数为 N)

20μL

1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21uL/管。

3.  加样(样本处理区)

将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

 

4.  PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1  将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

4.2  设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;

荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列仪器请勿选择

ROX 参比荧光,选择 None 即可。

4.3  推荐循环参数设置:


步骤

循环数

温度

时间

收集荧光信号

1

1 cycle

95℃

10min

2

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec


5.  结果分析判定

5.1  结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2  结果判断

阳性:检测通道 Ct 值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;

可疑:检测通道 35<Ct 值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为 35<Ct 值≤38,且曲线有明显的增长曲线, 判定为阳性,否则为阴性;

阴性:样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。

6.  质控标准

阴性质控品:Ct>38 或无 Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

7.  检测方法的局限性

1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

3. 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

4. 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

5. 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

6. 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

7. 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

【注意事项】

1. 所有操作严格按照说明书进行;

2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,混匀并短暂离心;

3. 反应液应避光保存;

4. 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

【参考文献】

[1]  Mengeling W L. Prevalence of porcine parvovirus induced reproductive; an abattoir study [J]. Am Vet Med Assoc, 1978, 172: 1291-1294.

[2]  Den S. Parvovirus-like particle associated with diarrhea in unweaned piglets [J]. Can Comp Med, 1985, 49: 343-345. [3]殷 震,  刘景华. 动物病毒学[M] . 2 版.  北京: 科学出版社, 1997.

[4] 国家质量监督检验检疫总局. SN/T 1919-2016 猪细小病毒病检疫技术规范[S].

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