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牛生长激素基因探针法荧光定量PCR试剂盒

简要描述:牛生长激素是牛脑垂体分泌的一种肽类激素,用于调节代谢过程、促进动物生长。研究发现将牛生长激素注入母牛体内可以增加其产奶量。牛生长激素基因探针法荧光定量PCR试剂盒就是以探针法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测牛生长激素基因的试剂盒

  • 更新时间:2023-11-30
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:2309

详细介绍

品牌YLKBIO纯度详询
货号YLK10312P规格50T
供货周期现货主要用途科研实验
应用领域化工,生物产业英文名称Bovine?growth?hormone?(BGH)Probe?qPCR?Kit
运输方式低温运输保存条件-20℃保存
有效期12个月自备试剂样品DNA
关联产品牛生长激素基因染料法荧光定量PCR试剂盒

产品简介

通用名称:牛生长激素基因探针法荧光定量PCR试剂盒

Name:Bovine growth hormone (BGH)Probe qPCR Kit

包装规格:50T/盒


产品及特点

牛生长激素是牛脑垂体分泌的一种肽类激素,用于调节代谢过程、促进动物生长。研究发现将牛生长激素注入母牛体内可以增加其产奶量。牛生长激素基因探针法荧光定量PCR试剂盒就是以探针法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测牛生长激素基因的试剂盒,它具有下列特点:

1.即开即用,用户只需要提供样品DNA模板。

2.引物和探针经过优化,灵敏性高。

3.提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4.特异性高,引物是根据牛生长激素基因DNA高度保守区设计,不会跟其他微生物的DNA发生交叉反应。

5.既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。

6.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7.本产品只能用于科研。

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为12个月。

自备试剂

样品DNA

使用方法

一、稀释标准曲线样品(以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。

1.       标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2,1。

2.      用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同。

3.      在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

4.      换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

5.      换枪头,在4号管中加入5 μL 1×10E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

6.      重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品DNA的制备

7.      如果有N个样品待提取,最好设置N+2个提取,多出的是PC(样品制备阳性对照)和NC(样品制备阴性对照)。可以取阳性对照的1000倍稀释液10μL再加上一定量的水,使总体积与待提取样品的规定体积一致,以此作为PC。另外用水作为NC。

8.      用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数DNA/提取试剂盒兼容。

三、Probe qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)

9.如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做1次重复,则标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),1个用于PCR阳性对照(用第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加):

成分/每管

样品管

N+2

PCR阴性对照管

标准曲线

样品管(1-6管)

A

10 μL

10 μL

10 μL

D

3 μL

3 μL

3 μL

N+2个待测DNA模板

7 μL

-

-

C

-

7 μL

-

6步所得标准曲线样品稀释液(1-6号)

-

-

7 μL1号样到1号管,2号样到2号管









11.盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR:

过程

温度

时间

预变性

95℃

10 min

PCR反应

45个循环)

95℃

15 sec

60

60 sec(采集FAM通道的荧光信号)






四、数据处理

12.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品核酸浓度的log值,再推算出其浓度。

13.如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于39。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于39则为阳性。如果在39-40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。

 

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