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两管式RT-PCR试剂盒(AMV-Taq)

简要描述:两管式RT-PCR试剂盒(AMV-Taq)使用重组禽类成髓纤维病毒逆转录酶(Avian Myeloblastosis Virus Reverse Transcriptase, AMV RT),从总 RNA 或者 Poly(A)+ RNA 合成第一链 cDNA 的试剂盒,含有 cDNA 第一链合成所需的所有试剂。

  • 更新时间:2022-09-26
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:132

详细介绍

品牌自营品牌CAS/
分子式/纯度详询
分子量/货号YLK10360P
规格50T供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业

中文名称:两管式RT-PCR试剂盒(AMV-Taq)

英文名称:Two-Tube  RT-PCR Kit(AMV-Taq)

本产品使用重组禽类成髓纤维病毒逆转录酶(Avian Myeloblastosis Virus Reverse Transcriptase, AMV RT),从总 RNA 或者 Poly(A)+ RNA 合成第一链 cDNA 的试剂盒,含有 cDNA 第一链合成所需的所有试剂。AMV RT 具有 RNA 聚合酶活性和 RNase H 活性,能够作用于 GC 含量高,二级结构复杂的 RNA。合成的第一链 cDNA 可广泛应用于第二链合成、杂交、PCR 扩增、Real-time PCR 反应等。


成 分

十孔盒包装

AMV 逆转录酶 ( RI)

50 μL

AMV RT Buffer dNTP

300 μL

Oligo (dT)18 引物(0.5 μg/μL)

50 μL

随机引物(0.5 μg/μL)

50 μL

PCR MagicMix 3.0,含染料

9 mL

RNase-free

5 mL

使用手册

1


两管式RT-PCR试剂盒(AMV-Taq)具有以下特点:

1.       即开即用,足够 50 次 RT 反应(20μL 体系)和 600 次 PCR 反应(30μL 体系)。

2.       cDNA 第一链合成试剂盒可灵活选用随机引物、Oligo dT 引物或基因专一引物,适合各种情况。

3.       两管式操作,RT 和 PCR 在不同试管中进行,便于单独优化 RT 反应或 PCR 反应条件。

4.       全长的第一链 cDNA 产量高,最长可合成 8 kb 的 cDNA。


注意事项:

1.    RNA 样品要避免基因组 DNA 污染。用于 cDNA 合成的器具须用 0.1% DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液 37℃浸泡 12 h;然后在 120℃高压灭菌 30 min 去除残留的 DEPC。

2.    用于 RNA 实验的试剂,须使用干热灭菌(180℃,60 min)或者上述 DEPC 处理的器具盛装,使用的无菌水须用 0.1% DEPC 处理后进行高温高压灭菌。建议 RNA 实验使用的器具、试剂和无菌水专用。

3.    不必从总 RNA 中分离 Poly(A)+ mRNA,但以 Poly(A)+ mRNA 为模板可以提高终产物得率和纯度。

4.    尽管以 Oligo dT 作引物无需优化,但随机六合引物和 RNA 的比例对于 cDNA 合成产物的平均长度非常关键,提高随机六合引物/RNA 的比值将导致短链 cDNA (500 bp)产量升高而减少,此比值则有利于长链 cDNA 的合成。

5.    提高反应温度到 50℃有利于解决富含 GC 二级结构的 mRNA 问题。AMV RT 的热稳定性相对于 M-MuLV 较好,在 37-50℃有较高活性。

6.   cDNA 产物应置于-20℃保存。实验操作时应将酶置于冰上,实验结束后于-20℃保存。


常见问题:

1.    反转录引物的选择

a.    用于第一链 cDNA 合成的引物,oligo dT 有利于长链 cDNA 的合成,使用该引物只需42℃进行反转录即可,无需 25℃预热。

b.    随机引物适合于 500 bp 以下的短链 cDNA 的合成,所转录的 RNA 模板无需 poly(A)尾,可转录 5'端区域。使用该引物前须将引物进行 25℃温浴。

c.    基因特异性引物主要用于合成特定基因片段长度的 cDNA。

2.   第一链 cDNA 合成原理及产物检测

a. cDNA 的合成是以 mRNA 为模板,以随机引物或者基因特异性引物或者 oligo dT 为引物,在反转录酶的催化下从 5'→3'合成第一链 cDNA。

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