详细介绍
品牌 | 自营品牌 | 纯度 | 详询 |
---|---|---|---|
货号 | YLK10360P | 规格 | 50T |
供货周期 | 现货 | 主要用途 | 科研 |
应用领域 | 化工,生物产业 | 中文名称: | 两管式RT-PCR试剂盒 |
英文名称 | AMV-Taq | 运输: | 低温 |
保存: | -20℃ | 有效期: | 1年 |
产品介绍: | AMV逆转录后再RT |
中文名称:两管式RT-PCR试剂盒(AMV-Taq)
英文名称:Two-Tube RT-PCR Kit(AMV-Taq)
本产品使用重组禽类成髓纤维病毒逆转录酶(Avian Myeloblastosis Virus Reverse Transcriptase, AMV RT),从总 RNA 或者 Poly(A)+ RNA 合成第一链 cDNA 的试剂盒,含有 cDNA 第一链合成所需的所有试剂。AMV RT 具有 RNA 聚合酶活性和 RNase H 的活性,能够作用于 GC 含量高,二级结构复杂的 RNA。合成的第一链 cDNA 可广泛应用于第二链合成、杂交、PCR 扩增、Real-time PCR 反应等。
包装及成分:
成 分 | 十孔盒包装 |
AMV 逆转录酶 (含 RI) | 50 μL |
AMV RT Buffer(含 dNTP) | 300 μL |
Oligo (dT)18 引物(0.5 μg/μL) | 50 μL |
随机引物(0.5 μg/μL) | 50 μL |
PCR MagicMix 3.0,含染料 | 9 mL |
RNase-free 水 | 5 mL |
使用手册 | 1 份 |
两管式RT-PCR试剂盒(AMV-Taq)具有以下特点:
1.即开即用,足够 50 次 RT 反应(20μL 体系)和 600 次 PCR 反应(30μL 体系)。
2.cDNA 第一链合成试剂盒可灵活选用随机引物、Oligo dT 引物或基因专一引物,适合各种情况。
3. 两管式操作,RT 和 PCR 在不同试管中进行,便于单独优化 RT 反应或 PCR 反应条件。
4.全长的第一链 cDNA 产量高,最长可合成 8 kb 的 cDNA。
注意事项:
1.RNA 样品要避免基因组 DNA 污染。用于 cDNA 合成的器具须用 0.1% DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液 37℃浸泡 12 h;然后在 120℃高压灭菌 30 min 去除残留的 DEPC。
2. 用于 RNA 实验的试剂,须使用干热灭菌(180℃,60 min)或者上述 DEPC 处理的器具盛装,使用的无菌水须用 0.1% DEPC 处理后进行高温高压灭菌。建议 RNA 实验使用的器具、试剂和无菌水专用。
3. 不必从总 RNA 中分离 Poly(A)+ mRNA,但以 Poly(A)+ mRNA 为模板可以提高终产物得率和纯度。
4. 尽管以 Oligo dT 作引物无需优化,但随机六合引物和 RNA 的比例对于 cDNA 合成产物的平均长度非常关键,提高随机六合引物/RNA 的比值将导致短链 cDNA (500 bp)产量升高而减少,此比值则有利于长链 cDNA 的合成。
5. 提高反应温度到 50℃有利于解决富含 GC 二级结构的 mRNA 问题。AMV RT 的热稳定性相对于 M-MuLV 较好,在 37-50℃有较高活性。
6. cDNA 产物应置于-20℃保存。实验操作时应将酶置于冰上,实验结束后于-20℃保存。
常见问题:
1. 反转录引物的选择
a. 用于第一链 cDNA 合成的引物,oligo dT 有利于长链 cDNA 的合成,使用该引物只需42℃进行反转录即可,无需 25℃预热。
b. 随机引物适合于 500 bp 以下的短链 cDNA 的合成,所转录的 RNA 模板无需 poly(A)尾,可转录 5'端区域。使用该引物前须将引物进行 25℃温浴。
c. 基因特异性引物主要用于合成特定基因片段长度的 cDNA。
2. 第一链 cDNA 合成原理及产物检测
a. cDNA 的合成是以 mRNA 为模板,以随机引物或者基因特异性引物或者 oligo dT 为引物,在反转录酶的催化下从 5'→3'合成第一链 cDNA。
产品咨询
电话
微信扫一扫