您好!欢迎访问优利科(上海)生命科学有限公司网站!
全国服务咨询热线:

15021281375

当前位置:首页 > 产品中心 > 科研试剂盒 > 生化试剂盒 > 乙酰胆/碱酯酶(AchE)活性测定试剂盒

乙酰胆/碱酯酶(AchE)活性测定试剂盒

简要描述:乙酰胆/碱酯酶(AchE)活性测定试剂盒测定意义:
AchE属于丝/氨酸水解酶,广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE催化乙酰胆/碱(Ach)水解,在神经传导调节中起重要作用。

  • 更新时间:2023-07-08
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:565

相关文章

Related Articles

详细介绍

品牌YLKBIOCAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号YLK-SH133
规格100管/96样、50管/48样供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
测定方法:微量法、可见分光光度法

乙酰胆/碱酯酶(AchE)活性测定试剂盒说明书

                                            微量法100T/96S


   正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

AchE属于丝/氨酸水解酶,广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE催化乙酰胆/碱(Ach)水解,在神经传导调节中起重要作用。

 

测定原理:

AchE催化Ach水解生成胆/碱,胆/碱与二硫对硝基苯甲酸(DTNB)作用生成5-巯基-硝基苯甲酸(TNB);TNB412nm处有吸收峰,通过测定412 nm吸光度增加速率,计算AchE活性。

自备仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。

 

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1瓶,4保存。

试剂二:液体×1瓶,4保存。

试剂三:粉剂×1支,4保存。临用前加入1.3 mL试剂二,充分震荡溶解。

试剂四:粉剂×1支,4保存。临用前加入1.3 mL试剂二,充分震荡溶解。

 

粗酶液提取:

1.        组织:按照组织质量(g:试剂一体(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心10min,取上清液待测。

2.        细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g4,离心10min,取上清置于冰上待测。

3.        血清等液体:直接测定

 

测定操作:

1.        分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到412 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二置于37水浴中预热30min

3. 微量石英比色皿/96板,依次加入20μL上清液、160 μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四,迅速混匀,于412nm处测定3min内吸光值变化,第10s吸光值记为A1,第190s吸光值记为A2A测定管=A2-A1

 

AchE活性计算:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1.        组织AchE活性

1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位

 

AchE酶活(nmol/min/mg prot)= (A÷ε÷d×V反总×109Cpr ×V样)÷T

= 245×A÷Cpr

2)按照样本质量计算

活性单位定义:每克组织每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位

AchE酶活(nmol/min/g 鲜重)= (A÷ε÷d×V反总×109W ×V÷V样总÷T

= 245×A÷W

2.        细菌、细胞AchE活性

活性单位定义:每104个细胞每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位

AchE酶活(nmol/min/104 cell)= (A÷ε÷d×V反总×109(细胞数量×V÷V样总÷T

= 245×细胞数量

3.        血清AchE活性

活性单位定义:每毫升血清每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位

AchE酶活(nmol/min /mL)= (A÷ε÷d×V反总×109)÷V÷T

=245×A

εTNB摩尔消光系数,13.6×103 L/mol/cmd:比色皿光径,1 cmV反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4LV样总:提取液体积,1 mL1061mol=1×106μmolCpr:蛋白浓度(mg/mL);V样:加入上清液体积(mL),0.02 mLW :样品质量;T:反应时间(min),3 min

 

b.使用96孔板测定的计算公式如下

1.        组织AchE活性

1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位

AchE酶活(nmol/min/mg prot)= (A÷ε÷d×V反总×109Cpr ×V样)÷T

= 490×A÷Cpr

2)按照样本质量计算

活性单位定义:每克组织每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位

AchE酶活(nmol/min/g 鲜重)= (A÷ε÷d×V反总×109W ×V÷V样总÷T

= 490×A÷W

2.        细菌、细胞AchE活性

活性单位定义:每104个细胞每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位

AchE酶活(nmol/min/104 cell)= (A÷ε÷d×V反总×109(细胞数量×V÷V样总÷T

= 490×细胞数量

3.        血清AchE活性

活性单位定义:每毫升血清每分钟催化产生1nmol TNB的酶量为1个酶活单位

AchE酶活(nmol/min /mL)= (A÷ε÷d×V反总×109)÷V÷T

=490×A

εTNB摩尔消光系数,13.6×103 L/mol/cmd96孔板光径,0.5 cmV反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4LV样总:提取液体积,1 mL1061mol=1×106μmolCpr:蛋白浓度(mg/mL);V样:加入上清液体积(mL),0.02 mLW :样品质量;T:反应时间(min),3 min

乙酰胆/碱酯酶(AchE)活性测定试剂盒仅供科研!

产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
优利科(上海)生命科学有限公司
地址:金大公路8218号1幢
邮箱:1431486511@qq.com
传真:
关注我们
欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息:
欢迎您关注我们的微信公众号
了解更多信息