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酸性磷酸酶(ACP)活性测定试剂盒

简要描述:酸性磷酸酶(ACP)活性测定试剂盒测定意义:
ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸,常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。

  • 更新时间:2023-07-08
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:406

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详细介绍

品牌YLKBIOCAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号YLK-SH131
规格100管/48样、50管/24样供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
测定方法:微量法、可见分光光度法

酸性磷酸酶ACP活性测定试剂盒说明书

                                                      微量法100T/48S



    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:                           

ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸,常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。

 

测定原理:

在酸性环境中,ACP催化对硝基苯磷酸二钠水解生成4-硝基苯/酚,在405nm有特征光吸收;通过测定405nm吸光度增加速率,来计算ACP活性。

 

自备仪器和用品:

酶标仪、96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。

 

试剂组成和配制:

试剂一:液体60 mL×2瓶,4保存。

试剂二:液体50 mL×1瓶,4保存。

试剂三:液体50 mL×1瓶,4保存。

 

粗酶液提取:

1.        组织:按照组织质量(g:试剂一体(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1 mL试剂一)进行冰浴匀浆410000g离心10 min,取上清液待测。

2.        细菌或细胞:按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1 mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3 min);然后10000g4,离心10min,取上清置于冰上待测。

3.        血液可直接测定,或者适当稀释后测定。

 

测定:

1. 酶标仪预热30 min,调节波长到405 nm

2. EP 管中加入下列试剂

试剂名称(μL

测定管

对照管

样本

10

10

试剂一

90

990

试剂二

900


30℃避光保温30 min

试剂三

400

400

混匀,吸取 200µL 加入96 孔板中,405 nm 下测定各管吸光值。ΔA=A测定管-A对照管。

注意:每个测定管需做一个对照管。

 

ACP活性计算:

标准曲线 y = 7.3336x + 0.0179R2 = 0.9996x为标准品浓度(μmol/mL),y为吸光值ΔA

1. 血液中ACP活性计算

活性单位定义:30℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol 4-硝基苯/酚定义为1个酶活单位。

ACP活力(μmol/min/mL)=ΔA-0.0179÷7.3336 ×V反总÷T÷V

= 0.4545 ×ΔA-0.0179

2. 组织、细菌或细胞中ACP活性计算

1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:30中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μmol 4-硝基苯/酚定义为1个酶活单位。

ACP活力(μmol/min/mg prot)= (ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反总÷T÷(V×Cpr)

=0.4545 ×ΔA-0.0179÷Cpr

2)按照样本质量计算

活性单位定义:30℃中每克组织每分钟催化产生1 μ mol 4-硝基苯/酚定义为1个酶活单位。

ACP活力 (μmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反总÷T÷(W×V ÷V 样总)

= 0.4545 ×ΔA-0.0179÷W

3)按照细菌或细胞数量计算

活性单位定义:30℃中每104个细菌或细胞每分钟催化产生1 μ mol 4-硝基苯/酚定义为1个酶活单位。

ACP 活力(μmol/min/104 cell)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反总÷T÷(细胞数量×V ÷V 样总

= 0.4545 ×ΔA-0.0179÷细胞数量

V反总:反应体系总体积(mL),1 mL W :样品质量,g V样:加入反应体系中样本体积(mL),0.01 mLV样总:提取液体积,1 mLT:反应时间(min),30 min500:细胞或细菌总数,500万。

 

注意事项:

ACP不稳定,尤其在37℃pH大于7的条件下活力丧失快,因此酸性磷酸酶样品一般需当天准备;血清样品中,每毫升血清中加入10mg柠檬酸氢二钠或者5mg硫酸氢钠,使pH降至6.5以下,或5ml血清加入30%醋酸溶液23滴,置于4℃可保存1周。

酸性磷酸酶ACP活性测定试剂盒仅供科研!

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