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脂肪酸合成酶(FAS)活性试剂盒

简要描述:脂肪酸合成酶(FAS)活性试剂盒测定意义:
FAS 是脂肪酸合成关键酶,催化乙酰辅酶 /A 和丙二酰辅酶 /A 而生成长链脂肪酸。FAS 普遍表达于各种组织细胞中,在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。

  • 更新时间:2023-07-09
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:455

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详细介绍

品牌YLKBIOCAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号YLK-SH129
规格100管/96样、50管/48样、25管/24样供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
测定方法:微量法、紫外分光光度法

脂肪酸合成酶(FAS)活性试剂盒说明书

 

微量法100T/96S

 

 

  意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

 

 

测定意义:

 

FAS 是脂肪酸合成关键酶,催化乙酰辅酶 /A 和丙二酰辅酶/ A 而生成长链脂肪酸。FAS 普遍表达于各种组织细胞中,在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。

 

 

测定原理:

 

FAS 催化乙酰 CoA、丙二酰 CoA NADPH 生成长链脂肪酸和 NADP+NADPH 340nm 有吸收峰,而 NADP+没有;通过测定 340nm 光吸收下降速率,计算 FAS 活性。

自备仪器和用品:

 

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪和蒸馏水。

 

 

试剂组成和配制:

 

试剂一:液体 100mL×1 瓶,-20保存。用前 1d 取出置于 4充分解冻后混匀。

 

试剂二:粉剂×1 瓶。临用前加入440μL试剂四,充分溶解,用不完的试剂分装后-20保存,禁止反复冻融。

 

试剂三:粉剂×1 瓶,4保存。临用前加入440μL试剂四,充分溶解,用不完的试剂分装后-20保存,禁止反复冻融。

 

试剂四:液体 20mL×1 , 4保存。

 

试剂五:粉剂×1 瓶,4保存。临用前加入 840μL试剂四,充分溶解,用不完的试剂分装后-20保存,禁止反复冻融。

 

 

粗酶液提取:

 

1.        组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL) 15~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。12000g4离心 40min,取上清置冰上待测。

 

2.        细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~10001 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 12000g4,离心 40min,取上清置于冰上待测。

 

3.        血清等液体:直接测定。

 

 

FAS 测定操作:

 

1.    分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长到 340 nm,蒸馏水调零。

 

2.    试剂四置于 40水浴中预热 30 min

 

3.     96 孔板或 EP 管中依次加入 20μL 上清液、4μL 试剂二、4μL 试剂三、164μL 试剂四和 8μL 试剂五,混匀后于 340nm 处测定吸光值,记录第 30s 90s 时吸光值,分别记录为 A1

A2 A =A1-A2

 

 

 

 

FAS 活性计算:

 

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

 

1)按照蛋白浓度计算

 

活性单位定义:37中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADPH 1 个酶活单位。 FAS(nmol/min/mg prot) =(A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(Cpr×V )÷T

 

=1608×A÷Cpr

 

2)按照样本质量计算

 

活性单位定义:37中每克组织每分钟氧化 1nmol NADPH 1 个酶活单位。

 

 

FAS(nmol/min/g 鲜重) = (△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(W×V ÷V 样总)÷T =1608×A ÷W

 

3)按细胞数量计算

 

活性单位定义:37中每 104 个细胞每分钟氧化 1nmol NADPH 1 个酶活单位。

 

FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(细胞数量×V ÷V 样总)÷T =1608×A ÷细胞数量

 

4)按液体体积计算

 

活性单位定义:37中每毫升样本每分钟氧化 1nmol NADPH 1 个酶活单位。

 

FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷V ÷T =1608×A

 

εNADPH 摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cmd:比色皿光径,1 cmV 反总:反应体系

总体积,200μL=2×10-4LCpr:上清液蛋白质浓度,mg/mLW :样品质量;V 样:加入

 

反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mLV 样总:提取液体积,1 mLT:反应时间,1min

 

b.使用 96 孔板测定的计算公式如下

 

1)按照蛋白浓度计算

 

活性单位定义:37中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADPH 1 个酶活单位。

 

FAS(nmol/min/mg prot) =(A÷ε÷d×V 反总×109)÷(Cpr×V )÷T =3216×A÷Cpr

 

2)按照样本质量计算

 

活性单位定义:37中每克组织每分钟氧化 1nmol NADPH 1 个酶活单位。

9

 

=3216×A÷W

 

3)按细胞数量计算

 

活性单位定义:37中每 104 个细胞每分钟氧化 1nmol NADPH 1 个酶活单位。

 

FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(细胞数量×V ÷V 样总)÷T =3216×细胞数量

 

4)按液体体积计算

 

活性单位定义:37中每毫升样本每分钟氧化 1nmol NADPH 1 个酶活单位。

 

FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V 反总×109 )÷V ÷T =3216×A

 

εNADPH 摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cmd96 孔板光径,0.5 cmV 反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4LCpr:上清液蛋白质浓度,mg/mLW :样品质量;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mLV 样总:提取液体积,1 mLT:反应时间,1min

脂肪酸合成酶(FAS)活性试剂盒仅供科研!

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