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果胶裂解酶(pectinate lyases,PL)试剂盒

简要描述:果胶裂解酶(EC4.2.2.10)是果胶酶的重要组成部分,是一种能降解植物细胞壁,导致植物组织软化甚至死亡的解聚酶,来源比较广泛,主要来源于微生物,可用于果汁、果酒的澄清,提高水果出汁率,植物病毒的纯化,纸浆的漂白和纺织品的生物精炼,在减少环境污染和降低能源消耗方面具有潜在的应用价值。果胶裂解酶(pectinate lyases,PL)试剂盒现货供应。

  • 更新时间:2023-07-09
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:1241

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详细介绍

品牌YLKBIOCAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号YLK-SH103
规格100管/48样、50管/24样供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
测试方法:微量法、紫外分光光度法

果胶裂解酶(pectinate lyasesPL)试剂盒说明书

                                          微量法100T/48S

 

    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

果胶裂解酶(EC4.2.2.10)是果胶酶的重要组成部分,是一种能降解植物细胞壁,导致植物组织软化甚至死亡的解聚酶,来源比较广泛,主要来源于微生物,可用于果汁、果酒的澄清,提高水果出汁率,植物病毒的纯化,纸浆的漂白和纺织品的生物精炼,在减少环境污染和降低能源消耗方面具有潜在的应用价值。

 

测定原理:

果胶裂解酶作用于果胶中的α-1,4糖苷键,生成在还原端C4C5之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸,在235nm处有特征吸收峰。

 

自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、恒温水浴锅。

 

试剂组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体6mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体6mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体6mL×1瓶,4℃保存。

 

酶液提取:

1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

3. 培养液:直接测定。

测定操作表:

1、   分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至235nm,蒸馏水调零。

2、   操作表


对照管

测定管

试剂一(μL


120

试剂二(μL

120


40℃温育3min

酶液(μL

20

20

混匀,40℃反应30min

试剂三(μL

60

60

混匀于微量石英比色皿/96孔板UV板)测定235nm处吸光值A,△A=A测定管-A对照管。

 

酶活性计算公式:

a.        用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 组织中PL活性

1)按照蛋白浓度计算

酶活性定义:40℃,pH5.5条件下,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min/mg prot= ε×d×V反总÷V×Cpr÷T

= 64.1×A÷Cpr

2)按照样本质量计算

酶活性定义:40℃,pH5.5条件下,每克组织每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min/g 鲜重)= ε×d×V反总÷V×W÷V样总)÷T

= 64.1×A÷W

2. 细菌、真菌PL活性

酶活性定义:40℃,pH5.5条件下,每104个细胞每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min/104cell= A ÷ε×d×V反总÷V×细胞数量÷V样总)÷T

 = 64.1×细胞数量

3. 培养液PL活性

酶活性定义:40℃,pH5.5条件下,每毫升培养液每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min/mL= ε×d×V反总÷V÷T

= 64.1×A

ε:不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cmd:比色皿光径,1cmV反总:反应总体积,0.2mLV样:反应体系中样本体积,0.02mLV样总:加入提取液体积,1mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW,样本质量,gT:反应时间,30min

 

b.       96孔板测定的计算公式如下

1. 组织中PL活性

1)按照蛋白浓度计算

酶活性定义:40℃,pH5.5条件下,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min/mg prot= ε×d×V反总÷V×Cpr÷T

= 128.2×A÷Cpr

2)按照样本质量计算

酶活性定义:40℃,pH5.5条件下,每克组织每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min/g 鲜重)= ε×d×V反总÷V×W÷V样总)÷T

= 128.2×A÷W

2. 细菌、真菌PL活性

酶活性定义:40℃,pH5.5条件下,每104个细胞每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的

 

酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min/104cell=ε×d×V反总÷V×细胞数量÷V样总)÷T

    = 128.2×细胞数量

3. 培养液PL活性

酶活性定义:40℃,pH5.5条件下,每毫升培养液每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min//mL= ε×d×V反总÷V÷T

= 128.2×A

ε:不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cmd:比色皿光径,0.5cmV反总:反应总体积,0.2mLV样:反应体系中样本体积,0.02mLV样总:加入提取液体积,1mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW,样本质量,gT:反应时间,30min

果胶裂解酶(pectinate lyasesPL)试剂盒仅供科研!

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