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绿脓假单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒

简要描述:绿脓假单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒绿脓假单胞菌又称铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),1882 年首先由 Gersard 从伤口脓液中分离到,是一种革兰氏阴性菌、好氧、呈长棒形的细菌,只有单向的运动性。

  • 更新时间:2024-04-17
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:80

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10392P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
保存条件低温运输,-20℃保存有效期12个月
试剂盒说明不同批号的试剂盒组分不可交互使用

绿脓假单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒


产品名称:绿脓假单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒

英文名称:Pseudomonas aeruginosa Probe qPCR Kit

绿脓假单胞菌又称铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),1882 年首先由 Gersard 从伤口脓液中分离到,是一种革兰氏阴性菌、好氧、呈长棒形的细菌,只有单向的运动性。它是一种机会性感染细菌,且对植物亦是机会 性感染的,感染后因脓汁和渗出液等病料呈绿色,故名。广泛分布于自然界及 正常人皮肤、肠道和呼吸道,是临床上较常见的条件致病菌之一,因此快速检测绿脓假单胞菌具有重要意义。本产品就是以探针法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测绿脓假单胞菌的试剂盒,它具有下列特点:

1.    即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板。

2.    引物和探针经过优化,灵敏性高。

3.    提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4.    特异性高,引物是根据绿脓假单胞菌高度保守区设计,不会跟其他病原菌

DNA 发生交叉反应。

5.    本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。

【试剂组成】

成分

十孔盒包装

2×Probe qPCR MagicMix

500 μL(本色盖)

荧光PCR 专用模板稀释液

1 mL黄盖

绿脓假单胞菌探针法   qPCR 引物

混合液

100 μL白盖

绿脓假单胞菌 qPCR 探针

50 μL(棕色管)

绿脓假单胞菌探针法   qPCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL)

50 μL黄盖

使用手册

1

【运输及保存】

低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。

【自备试剂】

样品 DNA。

【使用方法】

一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。

由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原, 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头,

2.    下同)。

在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震

荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4.    换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5.    换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6.   重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7.    如果有 N 个样品,最好设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性

对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为 NC。

8.    用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数 DNA/提取试剂盒兼容。

三、Probe qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)

9.    如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于 PCR 阳性对照(用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10.    在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好

后最后加):

成分

样品管

N+2

PCR

性对照管

标准曲线

样品管(2-7 管)

2×Probe qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

10 μL

绿脓假单胞菌 qPCR 探针

1 μL

1 μL

1 μL

绿脓假单胞菌探针法 qPCR 引物

混合液

2 μL

2 μL

2 μL

N+2 个待测 DNA 模板

7 μL

-

-

超纯水

-

7 μL

-

7 步所得标准曲线样品稀释液

2-7 号)

 

-

 

-

7 μL2 号样到

2 号管,3 号样到

3 号管

11.  盖上盖子后上机,进行 PCR


四、数据处理

12.  如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。

13.  如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。若重复结果 Ct值小于 40,扩增曲线有明显起峰,该样本判断为阳性,否则为阴性。

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