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犬冠状病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

简要描述:犬冠状病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒犬冠状病毒(Canine Corona Virus,CCoV )为单链 RNA 病毒,有 6-7 种多肽,其中 4 种是糖肽,不含 RNA 聚合酶及神经氨酸酶。

  • 更新时间:2024-04-17
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:139

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10395P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
保存条件低温运输,-20℃保存有效期12个月
试剂盒说明不同批号的试剂盒组分不可交互使用

犬冠状病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒


产品名称:犬冠状病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

英文名称:Canine Corona Virus (CCoV) Probe qRT-PCR Kit

犬冠状病毒(Canine Corona Virus,CCoV )为单链 RNA 病毒,有 6-7 种多肽,其中 4 种是糖肽,不含 RNA 聚合酶及神经氨酸酶。可使犬发生程度不同的胃肠炎症状,特征有频繁呕吐、腹泻、沉郁、厌食等症状。本病一年四季均可发生,以冬季多发,病犬是主要的传染原,犬可通过呼吸道、消化道、粪便及污  染物传染。该病一但发生,同窝犬同室犬很难控制均可造成感染。幼犬死亡率较  高,对幼犬的危害较大。最近的研究发现 CCoV 感染的宿主范围有不断扩大的趋势,许多野生动物如虎、狮、大熊猫、小熊猫、水紹也可感染。本产品就是以探针  法荧光定量RT-PCR 技术为基础开发的专门检测犬冠状病毒的试剂盒,它具有下列特点:

1.       即开即用,用户只需要提供样品 RNA 模板。

2.       引物和探针经过优化,灵敏性高。

3.       提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4.       特异性高,引物是根据犬冠状病毒高度保守区设计,不会跟其他病毒的 RNA 发生交叉反应。

5.       本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。

6.       本产品只能用于科研。


【试剂组成】

成分

十孔盒包装

探针法 qRT-PCR 缓冲液

500μL黄盖)

探针法 qRT-PCR 酶混合液

100μL红盖)

荧光 PCR 专用模板稀释液

1 mL(黄盖)

犬冠状病毒探针法 qRT-PCR 引物

混合液

100 μL白盖)

犬冠状病毒 qRT-PCR 探针

50 μL棕色管)

犬冠状病毒探针法 qRT-PCR 阳性

对照(1×10E8 拷贝/μL)

50 μL黄盖

使用手册

1



【运输及保存】低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。

【自备试剂】样品 RNA。

【注意事项】

一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能

1.    污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原, 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

2.    用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 RT-PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同)。

3.    在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4.    换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5.    换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6.    重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 RNA 的制备

7.    如果有 N 个样品,最好设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为 NC。

8.    用自选方法纯化样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。

Probe qRT-PCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)

9.    如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于 PCR 阳性对照(用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10.    在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设  置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好  后最后加):

成分

样品管N+2

RT-PCR

阴性对照

标准曲线样品管

2-7 管)

探针法 qRT-PCR 缓冲液

10 μL

10 μL

10 μL

探针法 qRT-PCR 酶混合液

2 μL

2 μL

2 μL

犬冠状病毒 qRT-PCR 探针

1 μL

1 μL

1 μL

犬冠状病毒探针法 qRT-PCR 引物

混合液

2 μL

2 μL

2 μL

待测样品 RNA 模板

5 μL

-

-

超纯水

-

5 μL

-

7 步所得标准曲线样品稀释液

2-7 号)

-

-

5 μL2 样到 2 号管,

3 号样到 3













11.  盖上盖子后上机

五、数据处理

12.  如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 C 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品RNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。

13.  如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。重复实验的 C

值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 35,则为阳性。


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