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人类白细胞抗原A基因染料法PCR试剂盒

简要描述:人类白细胞抗原A基因染料法PCR试剂盒人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)是人类的主要组织相容性复合体(MHC)的表达产物,该系统是目前所知人体最复杂的多态系统。

  • 更新时间:2024-04-18
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:68

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10396P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
保存条件低温运输,-20℃保存有效期12个月
试剂盒说明不同批号的试剂盒组分不可交互使用

人类白细胞抗原A基因染料法PCR试剂盒


产品名称:人类白细胞抗原A基因染料法PCR试剂盒

英文名称:Human Leukocyte Antigen-A(HLA-A)SYBR qPCR Kit

人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)是人类的主要组织相容性复合体(MHC)的表达产物,该系统是目前所知人体最复杂的多态系统。 根据基因产物的结构,功能,细胞分布等因素,将 HLA 基因分成了 3 大类,其中 HLA-I 型基因,包括了 HLA-A,HLA-B,HLA-C 等经典的抗原基因。本产品就是以荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测 HLA-A 基因的试剂盒,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。

2. 特异性高,引物是根据 HLA-A 基因高度保守区设计,不会扩增其他基因。

3. 引物和扩增体系经过优化,灵敏性比常规 PCR 高 100 倍。

4. 提供无传染性的 PCR 阳性对照,便于区分假阴性样品。

5. 一管式操作,荧光 PCR 检测,不容易产生环境污染。

6.本产品只能用于科研,本试剂盒足够 50 次 20μL 体系的 PCR。


【试剂组成】

成分

十孔盒包装

2×qPCR MagicMix

500μL(棕色)

荧光 PCR 专用模板稀释液

1 mL(黄盖)

HLA-A 基因染料法 qPCR 引物 混合液

100 μL(白盖)

HLA-A 基因染料法 qPCR 阳性对照

(1×10E8 拷贝/μL)

1mL(绿盖)

核酸释放剂试用装

1mL(绿盖)

使用手册

1 份



【运输及保存】低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。

【自备试剂】样品 RNA。

【注意事项】

一、制备标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原, 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。

1.标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

2.用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同)。

3.在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照(其浓度为 1×10E8 拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4.换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5.换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7.用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

8.如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。本试剂盒免费赠送1ml免DNA提取的核酸释放剂试用装,该释放剂的裂解液可以直接作为PCR 模板,省略了 DNA 提取步骤。

三、设置 qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)

9.如果进行定量分析,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照,6 个用于标准曲线样品。如果做定性分析,则 6 个标准曲线样品只选一个做(可以选 4 号,其余样品不变)。以下只介绍定量分析的反应设置。

10.在标记管中按下表加入各成分:

成分

N+2

样品管

PCR 阴性

对照管

标准曲线

样品管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

10 μL

HLA-A 基因染料法 qPCR 引物

混合液

2 μL

2 μL

2 μL

自备 10×ROX (见注)

2 μL

2 μL

2 μL

N+2 个待测样品 DNA 模板

6 μL

不加

不加

自备超纯水

不加

6 μL

不加

第 7 步所得标准曲线样品稀释液

(2-7 号)

不加

不加

6μL2 号样到

2 号管,3 号样到 3号管…)

注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照,其他荧光 PCR 仪器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、 RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480) 不需要使用 ROX,则用水替代。

11.盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR(具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化)。

四、荧光定量 PCR 反应参数

过程

温度

时间

预热

50℃

2 min

预变性

95℃

10 min

PCR 反应

(40 个循环)

95℃

15 sec

60℃

1 min采集 SYBR 通道的荧

光信号)

按仪器预设程序进行溶解曲线分析

五、数据处理

12.     设定 60℃-96℃范围的融解曲线分析,排除假阳性。

13.     如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品DNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。

14.     如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 40,则为阳性。

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