您好!欢迎访问优利科(上海)生命科学有限公司网站!
全国服务咨询热线:

15021281375

当前位置:首页 > 产品中心 > 科研试剂盒 > PCR试剂盒 > 人免疫缺陷病毒I型通用探针法RT-PCR试剂盒

人免疫缺陷病毒I型通用探针法RT-PCR试剂盒

简要描述:人免疫缺陷病毒I型通用探针法RT-PCR试剂盒人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus;abbr:HIV),即艾滋病(AIDS,获得性免疫缺陷综合征)病毒,是造成人类免疫系统缺陷的一种病毒。

  • 更新时间:2024-04-18
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:69

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10398P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
保存条件低温运输,-20℃保存有效期12个月
试剂盒说明不同批号的试剂盒组分不可交互使用

人免疫缺陷病毒I型通用探针法RT-PCR试剂盒


产品名称:人免疫缺陷病毒I型通用探针法RT-PCR试剂盒

英文名称:Human Immunodeficiency Virus 1(HIV-1) RT-PCR Kit

人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus;abbr:HIV),即艾滋病(AIDS,获得性免疫缺陷综合征)病毒,是造成人类免疫系统缺陷的一种病毒。1981年,人类免疫缺陷病毒在美国首ci发现。它是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒,属逆转录病毒的一种。目前全球流行的主要是 HIV-1。本产 品就是以探针法荧光定量 RT-PCR 技术为基础开发的专门检测人免疫缺陷病毒 I 型通用的试剂盒,它具有下列特点:

1.       即开即用,用户只需要提供样品RNA模板。

2.      引物和探针经过优化,分析灵敏性高。

3.      提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4.      特异性高,引物是根据人免疫缺陷病毒I型RNA高度保守区设计,可以检测人免疫缺陷病毒I型,不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。

5.      既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。

6.      本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量RT-PCR反应。

7.      本产品只能用于科研。


【试剂组成】

成分

包装

探针法qRT-PCR缓冲液

500μL(蓝盖)

探针法qRT-PCR酶混合液

100μL(红盖)

荧光PCR专用模板稀释液

1mL(绿盖)

人免疫缺陷病毒IqRT-PCR

引物-探针混合液

150μL(棕色管)

人免疫缺陷病毒IRT-PCR阳性对照(1×10E7拷贝/μL)

50μL(黄盖)

使用手册

1

【运输及保存】低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。

【自备试剂】超纯水,样品RNA。

【注意事项】

一、稀释标准曲线样品(以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。

1.      标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2,1。

2.      用带芯枪头分别加入45μL荧光RT-PCR专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同)。

3.      在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

4.      换枪头,在5号管中加入5μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

5.      换枪头,在4号管中加入5μL 1×10E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

6.      重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品RNA的制备

7.       如果有N个样品,最好设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。

8.      用自选方法纯化样品的RNA,本试剂盒跟市场上大多数RNA/提取试剂盒兼容。

三、Probe qRT-PCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)

9.      如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个RT-PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复,则标记N+4个RT-PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板),1个用于RT-PCR阳性对照(直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10.       在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加):


成分

样品管

N+2

RT-PCR阴性对照

标准曲线样品管

1-6管)

探针法qRT-PCR缓冲液

10μL

10μL

10μL

探针法qRT-PCR酶混合液

2μL

2μL

2μL

人免疫缺陷病毒IRT-PCR

引物-探针混合液

3μL

3μL

3μL

 N+2个待测RNA样本

5μL

不加

不加

超纯水

不加

5μL

不加

6步所得标准曲线样品稀释液(1-6号)

不加

不加

5μL1号样到1号管,2号样到2号管














11.      盖上盖子后上机,按下面参数进行RT-PCR:

过程

温度

时间

逆转录

50℃

30min

预变性

94℃

5min

RT-PCR反应

45个循环)

94℃

15sec

60

1min(采集FAM通道的荧光信号)

五、数据处理

12.       如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值,再推算出其浓度。

13.      如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于45。阳性对照必须有荧

光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于40。对待测样品,如果其Ct大于或等于45则为阴性,如果小于或等于40则为阳性。如果在40-45之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于45则为阴性,如果小于40,则为阳性。

产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
优利科(上海)生命科学有限公司
地址:金大公路8218号1幢
邮箱:1431486511@qq.com
传真:
关注我们
欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息:
欢迎您关注我们的微信公众号
了解更多信息