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人疱疹病毒 8 型探针法荧光定量PCR试剂盒

简要描述:人疱疹病毒 8 型探针法荧光定量PCR试剂盒人疱疹病毒 8 型(Human Herpesvirus-8,HHV-8) 会引起人类的原发和继发感染,原发感染在儿童中多见,水痘的出疹突发,常出现红色皮疹或斑疹, 继续发展为成串水疱、脓疱,最后结痂。

  • 更新时间:2024-04-18
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:78

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10401P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
保存条件低温运输,-20℃保存有效期12个月
试剂盒说明不同批号的试剂盒组分不可交互使用

人疱疹病毒 8 型探针法荧光定量PCR试剂盒


产品名称:人疱疹病毒 8 型探针法荧光定量PCR试剂盒

英文名称:Human Herpesvirus-8(HHV-8) Probe qPCR Kit

人疱疹病毒 8 型(Human Herpesvirus-8,HHV-8) 会引起人类的原发和继发感染,原发感染在儿童中多见,水痘的出疹突发,常出现红色皮疹或斑疹,  继续发展为成串水疱、脓疱,最后结痂。病情一般较轻,但偶可并发间质性肺炎和感染后脑炎。该病毒对人体健康造成严重损害,因此快速检测人疱疹病毒 8 型具有重要意义。本产品就是以探针法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测人疱疹病毒 8 型的试剂盒,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板。

2. 引物和探针经过优化,灵敏性高。

3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4. 特异性高,引物是根据牛腺病毒(4-8 型)DNA 高度保守区设计,不会跟其他微生物的 DNA 发生交叉反应。

5. 既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为 5 个数量级。

6. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。

7.本产品只能用于科研。

【试剂组成】

成分

五孔盒包装

2×Probe qPCR MagicMix

500 μL红盖)

荧光 PCR 专用模板稀释液

1 mL(绿盖)

超纯水

1 mL(白盖)

人疱疹病毒 8 型探针法 qPCR 引物-探针混合液

150 μL棕色管)

人疱疹病毒 8 型探针法 qPCR 阳性对照(1×10E7 拷贝/μL)

50 μL黄盖)

使用手册

1

【运输及保存】低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。

【自备试剂】样品RNA。

【注意事项】

一、稀释标准曲线样品(以 10E1-10E6 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本  产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2,1。

2.       用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同。

3.       在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4.       换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5.       换枪头,在 4 号管中加入 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6.       重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7.       如果有 N 个样品待提取,最好设置 N+2 个提取,多出的是 PC(样品制备阳

性对照)和 NC(样品制备阴性对照)。可以取阳性对照的 1000 倍稀释液10μL 再加上一定量的水,使总体积与待提取样品的规定体积一致,以此作为 PC。另外用水作为 NC。

8.       用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数 DNA/提取试剂盒兼容。

三、Probe qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)

9.       如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于 PCR 阳性对照(用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10.      在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设  置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好

后最后加):

成分/每管

样品管

N+2

PCR 阴性

对照管

标准曲线

样品管(1-6 管)

2×Probe qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

10 μL

人疱疹病毒 8 型探针法qPCR

-探针混合液

3 μL

3 μL

3 μL

N+2 个待测 DNA 模板

7 μL

-

-

超纯水

-

7 μL

-

6 步所得标准曲线样品稀释液

1-6 号)

 

-

 

-

7 μL1 号样到 1号管,2 号样到 2












11.  盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR:

过程

温度

时间

预变性

95℃

10 min

PCR 反应

45 个循环)

95℃

15 sec

60℃

60 sec采集 FAM 通道的荧光

信号)

四、数据处理

12.  如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品核酸浓度的 log 值,再推算出其浓度。

13.  如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 41。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 39。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 41 则为阴性,如果小于或等于 39 则为阳性。如果在 39-41 之间,则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 41 则为阴性,如果小于 41,则为阳性。

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