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支原体通用荧光探针法PCR定量检测试剂盒

简要描述:支原体通用荧光探针法PCR定量检测试剂盒支原体和亲缘关系很近的无胆甾原体、螺旋体统称霉形体。

  • 更新时间:2024-04-19
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:75

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10409P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
保存条件低温运输,-20℃保存有效期12个月
试剂盒说明不同批号的试剂盒组分不可交互使用

支原体通用荧光探针法PCR定量检测试剂盒


产品名称:支原体通用荧光探针法PCR定量检测试剂盒

英文名称:Mycoplasmaspp.Probe qPCR Kit

支原体和亲缘关系很近的无胆甾原体、螺旋体统称霉形体。霉形体是目前发现的最小的、Z简单的原核生物。它们缺乏细胞壁、有变形能力、能通过滤菌器、  可在无生命培养基中生长繁殖,成为细胞培养中常见的一种污染源,严重影响细胞生长率、细胞形态、基因表达、细胞代谢和细胞活力。因此快速灵敏检测支原体具有重要意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的试剂盒,它具有下列特点:

1.即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板。

2.引物和探针经过优化,灵敏性高。

3.提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4.特异性高,引物是根据支原体高度保守区设计,不会跟其他微生物的 DNA 发生交叉反应。

5.本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。

6.本产品只能用于科研。


【试剂组成】

 

包装

2×Probe qPCR MagicMix

500 μL(本色盖)

荧光 PCR 专用模板稀释液

1 mL(黄盖)

支原体通用探针法 qPCR 引物

混合液

100 μL(白盖)

支原体通用 qPCR 探针

100 μL(棕色管)

支原体通用 PCR 阳性对照

(1×10E8 拷贝/μL)

50 μL(黄盖)

核酸释放剂

20 次(1mL、绿盖)

使用手册

1 份

【运输及保存】

低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。


【自备试剂】样品 RNA。


【注意事项】

一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。

由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原, 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。

1.  标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

2.用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同)。

3.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4.换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用

5.换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用

6.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

 

二、样品 DNA 的制备

7.如果有 N 个样品,最好设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性

对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 阳性对照的 10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为 NC。

8.用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA/提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的核酸释放剂,本产品的裂解液可以直接作为 PCR 模板,省略了 DNA 提取步骤。其使用手册可向本公司客服索取。

 

三、Probe qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)

9.如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于 PCR 阳性对照(用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加):

 

样品管

N+2 个

PCR阴性对照

标准曲线样品管(2-7 管)

2×Probe qPCR   MagicMix

10μL

10μL

10μL

支原体通用 qPCR 探针

1ul

1ul

2ul

支原体通用探针法 qPCR 引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

N+2 个待测 DNA 模板

6ul

-

-

超纯水

-

6μL

-

第7步所得标准曲线样品稀释液(2-7   号)

-

-

各 6μL(2 号样到 2

号管,3 号样到 3 号管…)

11.盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR:

过程

温度

时间

预变性

95℃

5 min

PCR 反应

(40 个循环)

95℃

15 sec

60℃

1 min(采集 FAM 通道的荧光信号)

四、数据处理

12.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品RNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。

13.如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 40,则为阳性。

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