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猪链球菌实时荧光PCR试剂盒

简要描述:猪链球菌实时荧光PCR试剂盒猪链球菌(Streptococcus sui)是具有荚膜的一种革兰氏阳性球菌。

  • 更新时间:2024-04-22
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:63

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10410P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
保存条件低温运输,-20℃保存有效期12个月
试剂盒说明不同批号的试剂盒组分不可交互使用

猪链球菌实时荧光PCR试剂盒


产品名称:猪链球菌实时荧光PCR试剂盒

英文名称:Streptococcus sui SYBR qPCR Kit

猪链球菌(Streptococcus sui)是具有荚膜的一种革兰氏阳性球菌。可根据其细胞壁抗原成分将其大致归类为兰氏分群群链球菌。根据其荚膜抗原(CPS) 的不同,猪链球菌被分为 35(1~34 型,1/2 型)种血清型,其中 1,2,7,9 型是猪的致病菌。猪链球菌的定植部位为猪的上呼吸道,尤其是扁桃体和鼻腔。部分血清型的猪链球菌具有致病性,主要通过伤口感染。可引起猪的急性败血症脑膜炎、关节炎、心内膜炎、肺炎等疾病。部分菌株可引起人类感染,造成细菌性脑炎或引起中毒样休克综合征。因此快速检测猪链球菌具有重要意义。荧光定量PCR 是检测传染性疾病的主流技术,本产品就是以染料法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测猪链球菌通用的试剂盒,它具有下列特点:

1.即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。

2.特异性高,引物是根据猪链球菌通用高度保守区设计,不会扩增其他细菌。

3.引物和扩增体系经过优化,灵敏性比常规 PCR 高 100 倍。

4.提供无传染性的 PCR 阳性对照,便于区分假阴性样品。

5.一管式操作,荧光 PCR 检测,不容易产生环境污染。

6.本产品只能用于科研,本试剂盒足够 50 次 20μL 体系的 PCR。


【试剂组成】

成分

包装

2×qPCR MagicMix

500ul(棕色管)

荧光 PCR 专用模板稀释液

1ml(黄盖)

猪链球菌通用 qPCR 引

物混合液

100ul(白盖)

猪链球菌通用 qPCR 阳性对照

(1×10E8 拷贝/μL)

50ul(黄盖)

核酸释放剂

1ml(绿盖)

使用手册

1份

【运输及保存】

低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。


【自备试剂】样品 RNA。


【注意事项】

一、制备标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 6 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能

污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原, 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。

1.标记 6 个离心管,分别为 765432

2.用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同)

3. 7 号管中加入 5 μL 阳性对照(其浓度为 1×10E8 拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4.换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5.换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

 

二、样品 DNA 的制备

7.用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

8.如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。本试剂盒免费赠送1mlDNA提取的核酸释放剂,该释放剂的裂解液可以直接作为PCR 模板,省略了 DNA 提取步骤。其使用手册可向客服索取。

 

三、设置 qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)

9.如果进行定量分析,则标记 N+9 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照,6 个用于标准曲线样品。如果做定性分析,则 6 个标准曲线样品只选一个做(可以选 4 号,其余样品不变)。以下只介绍定量分析的反应设置。

10.在标记管中按下表加入各成分:

 

成分

N+2

样品管

PCR 阴性

对照管

标准曲线

样品管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

10 μL

猪链球菌通用 qPCR 引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

自备 10×ROX (见注)

2 μL

2 μL

2 μL

N+2 个待测样品 DNA 模板

6 μL

不加

不加

自备超纯水

不加

6 μL

不加

7 步所得标准曲线样品稀释液

2-7 号)

 

不加

 

不加

6μL2 号样到 2 号管,3 号样到 3

号管…)

 

 

:ABI75007700 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照,其他荧光 PCR 仪器(如 iCycler IQMJ OptionMJ Chromo4MX3000MX4000RotorGene 3000RotorGene 6000 LightCycler480) 不需要使用 ROX,则用水替代。

 

11.  盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR(具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化)。

 

四、荧光定量 PCR 反应参数

过程

温度

时间

预变性

95

10min

PCR 反应

40 个循环

95℃

15 sec

60℃

1 min(采集 SYBR 通道的荧光信号)

按仪器预设程序进行解曲线分析

 

五、数据处理

12.设定 60-96℃范围的熔解曲线分析,排除假阳性。

13.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品DNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。

14.如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 40,则为阳性。

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