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铜蓝蛋白(Ceruloplasmin,Cp)测定试剂盒说明书

发布时间:2023/11/9      点击次数:703

铜蓝蛋白(CeruloplasminCp)测定试剂盒说明书

                                                  微量法100T/48S

 

 

    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

铜蓝蛋白是血浆的含铜蛋白,有运输铜的功能,同时具有氧化酶的活性,是细胞外液重要的抗氧化剂。

 

测定原理:

铜蓝蛋白催化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺生成蓝色产物,在645nm处有特征吸收峰,依此可得铜蓝蛋白活性。

 

自备实验用品及仪器:

天平、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

 

试剂组成和配制:

试剂一:液体10mL×1瓶,4保存。

试剂二:液体7mL×1瓶,4保存。

试剂三:液体15mL×1瓶,4避光保存。(使用前37预热)

 

样本前处理:

1、   血清(浆)等液体样本:直接检测。

2、   动植物组织样本:称取约0.1g组织,加入1mL蒸馏水,进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

 

测定操作表:

1、   分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至645nm,蒸馏水调零。

2、   操作表


空白管

测定管

样品(µL

30

30

试剂一(µL

90

90

试剂二(µL

60


混匀,37预热5min

试剂三(µL

120

120

混匀,37反应30min

试剂二(µL


60

混匀,25室温放置5min,取200µL于微量石英比色皿/96孔板中,测定645nm处吸光值。

ΔA=A测定-A空白。

 

计算公式:

a.        用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1.按体积计算

酶活定义:37条件下 每分钟每毫升样品与底物作用吸光度升高0.01为一个酶活单位。

Cp活力(U/mL=ΔA×V反总÷0.01÷V÷T = 33.33×ΔA

 

2.按鲜重计算

单位定义:37℃条件下,每分钟每克样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。

Cp活力(U/g鲜重=ΔA×V反总÷0.01÷W×V÷V样总)÷T = 33.33×ΔA÷W

3.按蛋白浓度计算

单位定义:37℃条件下,每分钟每毫克蛋白样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。

Cp活力(U/ mg prot=ΔA×V反总÷0.01÷Cpr×V样)÷T = 33.33×ΔA÷Cpr

 

V样:0.03 mLV反总:0.3 mLT:反应时间,30minV样总:加入提取液体积,1mL Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g

 

b.       用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、   按体积计算

酶活定义:37条件下 每分钟每毫升样品与底物作用吸光度升高0.005为一个酶活单位。

Cp活力(U/mL=ΔA×V反总÷0.005÷V÷T = 66.66×ΔA

2、   按鲜重计算

单位定义:37℃条件下,每分钟每克样品与底物作用吸光值升高0.005为一个酶活单位。

Cp活力(U/g鲜重=ΔA×V反总÷0.005÷W×V÷V样总)÷T = 66.66×ΔA÷W

3、   按蛋白浓度计算

单位定义:37℃条件下,每分钟每毫克蛋白样品与底物作用吸光值升高0.005为一个酶活单位。

Cp活力(U/ mg prot=ΔA×V反总÷0.005÷Cpr×V样)÷T = 66.66×ΔA÷Cpr

V样:0.03 mLV反总:0.3 mLT:反应时间,30minV样总:加入提取液体积,1mL Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g

 

注意事项:

试剂二和试剂三有一定的毒性和刺激性,请操作时做好防护措施。


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