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羟自由基清除能力测定试剂盒说明书

发布时间:2023/11/9      点击次数:727

羟自由基清除能力测定试剂盒说明书

微量法100T/96S

 

   :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子,造成细胞结构和功能受损,进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一,在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。

 

测定原理:

H2O2/ Fe2+ 通过Fenton反应产生羟自由基,将邻二氮菲- Fe2+水溶液中Fe2+氧化为Fe3+ ,导致536nm吸光度下降,样品对536nm吸光度下降速率的抑制程度,反映了样品清除羟自由基的能力。

 

自备实验用品:

恒温水浴锅、酶标仪、96孔板和蒸馏水。

 

试剂组成和配制:

提取液:液体100 mL×1瓶,4保存。

试剂一:液体12mL×1瓶,4避光保存。

试剂二:液体6mL×1瓶,4避光保存。

试剂三:液体12 mL×1瓶,4保存。

试剂四:液体6mL×1瓶,4保存。

 

样品的制备:

1.        组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2.        血清、果汁等液体样品可直接测定。

3.        提取物(或者药物)可配制成一定浓度,如5 mg/mL

 

操作步骤:

1、   酶标仪预热30min,调节波长至536nm

2、   工作液配制:使用之前按照每管试剂一:试剂二:试剂三=100:50:100µL的比例配制,用多少配多少,混匀。

3、   EP管中加入如下试剂


空白管

对照管

测定管

工作液(µL

250

250

250

混匀,防止局部颜色过浓

样品(µL



50

试剂四(µL


50

50

H2OµL

100

50


混匀,37保温60min8000g 25℃离心5min吸取200μL96孔板中测定536nm吸光值,空白管、对照管和测定管的吸光值分别记为A空、A对和A测。

 

注意:空白管和对照管只需测定一次。

 

计算公式:

羟自由基清除率 D% =A-A对)÷A-A对)×100%

A空、A对、A测:空白管、对照管和测定管的吸光值。

 

注意事项:

为了比较不同样品羟自由基清除能力,对于同一批样品必须加入等量的样品,血清、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积,提取物(或者药物)配制成同样浓度。


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