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尿酸(Uric Acid, UA)含量测定试剂盒说明书

发布时间:2023/11/8      点击次数:702

尿酸(Uric Acid, UA)含量测定试剂盒说明书


微量法 100T/96S


注 意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。


测定意义:


UA 是鸟类和爬行类动物的主要代谢产物,正常人体尿液中产物主要为尿素,含少量尿酸。此外,UA 还是重要的抗氧化剂,能清除超氧化物,羟自由基等。体内 UA 生成量和排泄量不平衡会导致多种疾病的发生。例如,血中 UA 升高会引起痛风、肾功能损害和动脉硬化,相反 UA 降低会引起恶性贫血,在临床诊断上具有重要的意义。



测定原理:


尿酸酶能催化 UA 生成尿囊素,CO2 及 H2O2,H2O2 氧化亚铁氰hua钾中的 Fe2+ 生成 Fe3+ ,Fe3+进一步与酚和 4-氨基安替比林缩合生成红色醌类化合物,在 505nm 下有特征吸收峰,测定反应体系 505nm 的吸收值,可计算尿酸的含量。



自备实验用品及仪器:


恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。



试剂组成和配制:


缓冲液:液体 20mL×1 瓶,4℃保存。


试剂一:


A:用于标准管和测定管,粉剂 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 13mL 缓冲液溶解。


B:用于空白管,粉剂 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 7 mL 缓冲液溶解。


试剂二:粉剂 1 管,4℃避光保存,使用前加 2mL 蒸馏水溶解,60℃加热溶解。



样品的制备:


1.        动植物组织:建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 生理盐水或蒸馏水,进行冰浴匀浆,然后 8000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。


2.        血清,培养液:直接检测。


测定操作表:


1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 505nm。


2、 操作表


标准管

空白管

测定管





试剂一(μL)

A, 60

B, 60

A, 60





H2O(μL)

180

240

180





试剂二(μL)

60







样品(μL)



60






混匀,37℃水浴 30min,取 200µL 于微量石英比色皿/96 孔板中,测定 505nm 处各管吸光值,标准管和空白管只需做一管。


UV 含量计算公式:


1.    组织:


(1)按样本重量计算


尿酸含量(μmol/g 鲜重)=C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷(W÷V样总)=0.5×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W

(2)按样本蛋白浓度计算


尿酸含量(μmol/mg prot)=C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷ Cpr =0.5×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr


尿酸(μmol/L)= C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)×103 =500×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)


C   标:标准品浓度 0.5μmol/mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g ;Cpr:


样本蛋白浓度,mg/mL;103  :1μmol/ L=103μmol/ mL


注意事项:


1.    血清样本请在 24 小时内测定,或者 4℃密封避光保存不超过 72 小时。


2.    吸光值大于 0.8 可用蒸馏水稀释样本,并在计算公式中算入稀释倍数。


3.    z低检出限为 10μmol/L。




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