您好!欢迎访问优利科(上海)生命科学有限公司网站!
全国服务咨询热线:

15021281375

当前位置:首页 > 产品中心 > 科研试剂盒 > 生化试剂盒 > 抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性测定试剂盒

抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性测定试剂盒

简要描述:抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性测定试剂盒测定意义:
APX是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一,也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX具有多种同功酶,分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体,以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化H2O2氧化AsA,是植 AsA 的主要消耗者。APX的活性直接影响到AsA的含量,APX与AsA具有一定的负相关性。

  • 更新时间:2023-07-08
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:621

相关文章

Related Articles

详细介绍

品牌YLKBIOCAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号YLK-SH137
规格100管/96样、50管/48样供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
测定方法:紫外分光光度法、微量法

抗坏血酸过氧化物酶APX活性测定试剂盒说明书

                                               微量法100T/96S

 

 

    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

APX是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一,也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX具有多种同功酶,分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体,以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化H2O2氧化AsA,是植 AsA 的主要消耗者。APX的活性直接影响到AsA的含量,APXAsA具有一定的负相关性。

 

测定原理:

APX 催化H2O2氧化AsA,通过测定AsA氧化速率,来计算得APX活性。

 

自备仪器用品:

低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体120mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加3 mL蒸馏水充分溶解。

试剂三:液体3mL×1支,4℃保存。

 

粗酶液提取:

按照组织质量(g:试剂一体(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。13000g4离心20min,取上清置冰上待测。

 

测定:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min以上,调节波长到290nm,用蒸馏水调零。

2. 试剂一在25℃中预热30min

3.依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、140μL预热的试剂一20μL试剂二和20μL试剂三,迅速混匀后在290nm测定10s130s光吸收A1A2A=A1-A2

 

APX活性计算:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)  按样本蛋白浓度计算

活性单位定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol AsA 1个酶活单位。

APX(nmol/min/mg prot) = A÷(ε×d×V反总×109÷(Cpr×V)÷T

=1786×A÷ Cpr

2按样本质量计算

活性单位定义:每g组织每分钟氧化1nmol AsA 1个酶活单位。

APX(nmol/min/g 鲜重 ) = A÷(ε×d×V反总×109÷(W×V÷V样总)÷T

 

=1786×A ÷W

εAsA290nm处摩尔吸光系数为2.8×103 L/mol/cmd:比色皿光径(cm),1 cmV反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4 L1091mol=1×109nmolCpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),20μL=0.02mLV样总:提取液体积,1 mLT:催化反应时间(min),2min

 

b.使用96孔板测定的计算公式如下

(1)  按样本蛋白浓度计算

活性单位定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol AsA 1个酶活单位。

APX(nmol/min/mg prot) = A÷(ε×d×V反总×109÷(Cpr×V)÷T

=3571×A÷ Cpr

2按样本质量计算

活性单位定义:每g组织每分钟氧化1nmol AsA 1个酶活单位。

APX(nmol/min/g 鲜重) = A÷(ε×d×V反总×109÷(W×V÷V样总)÷T

=3571×A ÷W

εAsA290nm处摩尔吸光系数为2.8×103 L/mol/cmd96孔板光径(cm),0.5 cmV反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4 L1091mol=1×109nmolCpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),20μL=0.02mLV样总:提取液体积,1 mLT:催化反应时间(min),2min

 

注意事项:

配制好的试剂二4℃保存,并且3天内使用完。

抗坏血酸过氧化物酶APX活性测定试剂盒仅供科研!

产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
优利科(上海)生命科学有限公司
地址:金大公路8218号1幢
邮箱:1431486511@qq.com
传真:
关注我们
欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息:
欢迎您关注我们的微信公众号
了解更多信息