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抗坏血酸氧化酶(AAO)活性测定试剂盒

简要描述:抗坏血酸氧化酶(AAO)活性测定试剂盒测定意义:
AAO是定位于植物细胞壁的糖蛋白,属“蓝铜氧化酶"家族。细胞壁内的抗坏血酸和AAO与细胞壁的代谢和生长有着密切的联系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通过质膜上的细胞色素b还原,该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。

  • 更新时间:2023-07-08
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:570

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详细介绍

品牌YLKBIOCAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号YLK-SH136
规格100管/96样、50管/48样供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
测定方法:微量法、可见分光光度法

抗坏血酸氧化酶AAO活性测定试剂盒说明书

                                                    微量法100T/96S

 

 

    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

AAO是定位于植物细胞壁的糖蛋白,属蓝铜氧化酶"家族。细胞壁内的抗坏血酸和AAO与细胞壁的代谢和生长有着密切的联系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通过质膜上的细胞色素b还原,该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。

 

测定原理:

AAO可直接氧化AsA,通过测定AsA的氧化量,可计算得AAO活力。

 

实验中所需仪器及设备:

低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。

 

试剂组成和配制:

试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入2mL蒸馏水充分溶解。

 

粗酶液提取:

按照组织质量(g:试剂一体(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。16000g4离心10min,取上清置冰上待测。

 

AAO测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到265 nm

2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min

3. 依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、170μL预热的试剂二和10μL试剂三,迅速混匀后在265nm测定10s130s光吸收A1A2A =A1-A2

 

AAO活性计算公式:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1). 按蛋白浓度计算

AAO活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol AsA 1个酶活单位

AAO(nmol/min /mg prot) = A÷(ε×d×V反总×109÷(Cpr×V)÷T

= 92.4×A÷Cpr

(2). 按样本质量计算

AAO活性单位定义:25℃中每克样本每分钟氧化1nmol AsA 1个酶活单位

 

AAO(nmol/min/g 鲜重) = A÷(ε×d×V反总×109÷(W×V÷V样总)÷T

= 92.4×A÷W

εAsA265nm处摩尔吸光系数为5.42×104 L/mol/cmd:比色皿光径(cm),1 cm V反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4 L1061mol=1×106μmolCpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),20μL=0.02 mLV样总:提取液体积,1 mL

T:催化反应时间(min),2min

 

b.使用96孔板测定的计算公式如下

(1). 按蛋白浓度计算

AAO活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol AsA 1个酶活单位

AAO(nmol/min /mg prot) = A÷(ε×d×V反总×109÷(Cpr×V)÷T

=184.8×A÷Cpr

(2). 按样本质量计算

AAO活性单位定义:25℃中每克样本每分钟氧化1nmol AsA 1个酶活单位

AAO(nmol/min/g 鲜重) = A÷(ε×d×V反总×109÷(W×V÷V样总)÷T

= 184.8×A÷W

εAsA265nm处摩尔吸光系数为5.42×104 L/mol/cmd96孔板光径(cm),0.5 cm V反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4 L1061mol=1×106μmolCpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),20μL=0.02 mLV样总:提取液体积,1 mL

T:催化反应时间(min),2min

 

注意事项:

配制好的试剂放在4℃保存,三天内使用完。


抗坏血酸氧化酶AAO活性测定试剂盒仅供科研!

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