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乙醇脱氢酶(ADH)活性测定试剂盒

产品简介

乙醇脱氢酶(ADH)活性测定试剂盒测定意义:
ADH是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH主要在肝脏生成,肝脏损伤导致ADH释放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否异常。

产品型号:
更新时间:2025-06-20
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乙醇脱氢酶(ADH)活性测定试剂盒说明书

                                              微量法 100T/96S

 

    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

ADH是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH主要在肝脏生成,肝脏损伤导致ADH释放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否异常。

 

测定原理:

ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+NADH340nm处有吸收峰,而NAD+没有;测定340nm 吸光度下降速率,来计算ADH活性。

 

自备仪器和用品:

研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液器和蒸馏水。

 

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1瓶,室温保存。

试剂二:液体×1瓶,4保存。              

试剂三:粉剂×2瓶,-20℃保存,临用前每瓶加入9mL试剂二,现配现用。

试剂四:液体×1支,4保存。

 

粗酶液提取:

1、   组织:按照组织质量(g:试剂一体(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。16000g4离心20min,取上清置冰上待测。

2、   细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);16000g 4离心20min,取上清液置冰上待测。

3、血清等液体:直接测定。

 

ADH测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂三在25水浴中保温30 min

3. 在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL样本上清液、160μL试剂三和20μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s75s时吸光值,分别记为A1A2A测定管=A1-A2

 

计算公式:

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADH 1个酶活单位

 

ADH (nmol/min/mg prot) =(A÷ε÷d×V反总×109)÷(Cpr×V)÷T

=1608×A ÷Cpr

2)按照样本质量计算

活性单位定义:25中每克组织每分钟氧化1nmol NADH 1个酶活单位

ADH (nmol/min/g 鲜重) =(A÷ε÷d×V反总×109)÷(W×V÷V样总)÷T

=1608×A ÷W

3)按细胞数量计算

活性单位定义:25中每104个细胞每分钟氧化1nmol NADH 1个酶活单位

ADH (nmol/min/104cell) = (A÷ε÷d×V反总×109) ÷(细胞数量×V÷V样总)÷T

=1608×A ÷细胞数量

4)按液体体积计算

活性单位定义:25中每毫升血清每分钟氧化1nmol NADH 1个酶活单位

ADH (nmol/min/mL) =(A÷ε÷d×V反总×109) ÷V÷T

=1608×A

εNADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cmd:比色皿光径,1 cmV反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4 LCpr:上清液蛋白质浓度,mg/mLW :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mLV样总:提取液体积,1 mLT:反应时间,1min

 

b.使用96孔板测定的计算公式如下

1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADH 1个酶活单位

ADH (nmol/min/mg prot) =(A÷ε÷d×V反总×109) ÷(Cpr×V)÷T

=3215×A÷Cpr

2)按照样本质量计算

活性单位定义:25中每克组织每分钟氧化1nmol NADH 1个酶活单位

ADH (nmol/min/g 鲜重) =(A÷ε÷d×V反总×109) ÷(W×V÷V样总)÷T

=3215×A÷W

3)按细胞数量计算

活性单位定义:25中每104个细胞每分钟氧化1nmol NADH 1个酶活单位

ADH (nmol/min/104cell) =(A÷ε÷d×V反总×109) ÷(细胞数量×V÷V样总)÷T

=3215×细胞数量

4)按液体体积计算

活性单位定义:25中每毫升血清每分钟氧化1nmol NADH 1个酶活单位

ADH (nmol/min/mL) =(A÷ε÷d×V反总×109) ÷V÷T

=3215×A

εNADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cmd96孔板光径,0.5 cmV反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4 LCpr:上清液蛋白质浓度,mg/mLW :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mLV样总:提取液体积,1 mLT:反应时间,1min


乙醇脱氢酶(ADH)活性测定试剂盒仅供科研!

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