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NADH氧化酶(NADH oxidase,NOX)试剂盒

简要描述:NOX(EC 1.6.99.3)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可在氧气存在下,直接将NADH氧化为NAD。该酶不仅参与NAD的再生,而且与免疫反应密切相关。NADH氧化酶(NADH oxidase,NOX)试剂盒现货供应。

  • 更新时间:2023-07-09
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:671

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详细介绍

品牌YLKBIOCAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号YLK-SH112
规格100管/96样、50管/48样供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
测定方法:微量法、可见分光光度法

NADH氧化酶(NADH oxidaseNOX)试剂盒说明书

                                      微量法 100/96

 

    正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

NOXEC 1.6.99.3)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可在氧气存在下,直接将NADH氧化为NAD。该酶不仅参与NAD的再生,而且与免疫反应密切相关。

 

测定原理:

NOX能够将NADH氧化为NADNADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝(DCPIP)的还原相偶联,蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP,在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水

 

试剂的组成和配制:

试剂一:液体100mL×1瓶,-20保存;

试剂二:液体20mL×1瓶,-20保存;

试剂三:液体1.5mL×1瓶,-20保存;

试剂四:液体25mL×1瓶,4保存。

试剂五粉剂×1瓶,-20保存;临用前加入5mL蒸馏水,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融

 

样本的前处理:

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

        准确称取0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

        将匀浆600g4离心5min

        弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11100g4离心10min

        上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白,可用于测定从线粒体泄漏的NOX(此步可选做)。

        步骤④中的沉淀即为线粒体,加入200uL试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10秒,重复30次),用于NOX活性测定。

血清(浆)样品:直接检测。

 

测定步骤:

1、  分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至600nm,蒸馏水调零。

2、  样本测定

1)试剂四于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min

2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、200μL试剂四和40μL试剂五,混匀,记录600nm20s时吸光值A1 1min20s后的吸光值A2计算ΔA=A1-A2


NOX活力单位的计算:

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清(浆)NOX活力的计算:

单位的定义:每mL血清(浆)在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。

NOXU/mL)=ΔA×V反总÷V÷0.01÷T=2500×ΔA

2、组织、细菌或细胞中NOX活力的计算:

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。

NOXU/mg prot=ΔA×V反总÷V×Cpr÷0.01÷T=2500×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。

NOXU/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V÷V样总)÷0.01÷T=505×ΔA÷W

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。

NOXU/104 cell=ΔA×V反总÷(500×V÷V样总)÷0.01÷T=1.01×ΔA

V反总:反应体系总体积,0.25mL V样:加入样本体积,0.01mLV样总:加入提取液体积,0.202 mLT:反应时间,1 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量;500:细胞或细菌总数,500万。

 

b. 使用96孔板测定的计算公式如下:

1、血清(浆)NOX活力的计算:

单位的定义:每mL血清(浆)在每mL反应体系中每分钟A600变化0.005定义为一个酶活力单位。

NOXU/mL)=ΔA×V反总÷V÷0.01÷T=5000×ΔA

2、组织、细菌或细胞中NOX活力的计算:

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A600变化0.005定义为一个酶活力单位。

NOXU/mg prot=ΔA×V反总÷V×Cpr÷0.005÷T=5000×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织在每mL反应体系中每分钟A600变化0.005定义为一个酶活力单位。

NOXU/g 鲜重)=ΔA×V反总÷(W× V÷V样总)÷0.005÷T=1010×ΔA÷W

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A600变化0.005定义为一个酶活力单位。

NOXU/104 cell=ΔA×V反总÷(500×V÷V样总)÷0.005÷T=2.02×ΔA

V反总:反应体系总体积,0.25mL V样:加入样本体积,0.01mLV样总:加入提取液体积,0.202 mLT:反应时间,1 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量;500:细胞或细菌总数,500万。

NADH氧化酶(NADH oxidaseNOX)试剂盒仅供科研!

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