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HUVEC+RFP 人脐静脉内皮细胞永生化+RFP

简要描述:HUVEC+RFP 人脐静脉内皮细胞永生化+RFP该细胞来源于人静脉内皮,可在半固体培养基中形成克隆,在免疫抑制小鼠中不能形成肿瘤。
该细胞通过慢病毒转染的方式携带RFP基因。

  • 更新时间:2024-03-13
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:59

详细介绍

品牌ATCC货号YLK-XB1659h
规格1×10⁶cells/T25培养瓶供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
英文名称HUVEC+RFP

HUVEC+RFP 人脐静脉内皮细胞永生化+RFP


细胞特性:

1) 来源:人脐带组织

2) 形态:内皮细胞样 贴壁生长

3) 含量:>1x10^6  细胞数

4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途:仅供科研使用。


细胞筛选

该细胞为稳定转染RFP的细胞,随细胞传代次数的增加,其RFP荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度,可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。

建议收到细胞后至少传3代,冻存留种后再进行筛选。

初次进行细胞筛选时,建议加入终浓度为1ug/ml嘌呤霉素的完培维持培养,若无细胞漂浮或者漂浮较少,即可更换为含2ug/ml嘌呤霉素的完培继续筛选,以此类推,至最高药物浓度为5ug/ml。若筛选过程中,漂浮细胞大于60%,则停止筛选,换成正常培养基培养,至细胞密度约80%,可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖,可停止筛选,用不含药完培正常培养。


运输和保存:

干冰运输及复苏好存活细胞

(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。


细胞接收后的注意事项:

1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。

3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完培6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完培来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。


培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备内皮细胞培养体系  

内皮细胞培养基础培养基                 93%

胎牛血清(FBS)                              5%

内皮细胞培养添加剂                         1%

青霉/素/链霉/素,P/S                           1%

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。


细胞处理:

1) 冻存细胞的复苏:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完培的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完培重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完培的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。


HUVEC+RFP 人脐静脉内皮细胞永生化+RFP

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