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副流感病毒通用探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

简要描述:副流感病毒通用探针法荧光定量RT-PCR试剂盒艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile)属厌氧性细菌,一般寄生在人的肠道内。

  • 更新时间:2024-04-16
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:81

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10381P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
保存条件低温运输,-20℃保存有效期12个月
试剂盒说明不同批号的试剂盒组分不可交互使用

副流感病毒通用探针法荧光定量RT-PCR试剂盒


商品名称:副流感病毒通用探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

副流感病毒是常常引起儿童下呼吸道感染的一种病毒,其致病性仅次于呼吸道合胞病毒 (RSV)。与RSV一样,人类副流感病毒可以造成反复发作的上呼吸道感染(如感冒和喉咙痛)。它也能造成严重的反复感染的下呼吸道疾病(如肺  炎,支气管炎和细支气管炎),特别是在老年人中和有免疫缺陷人群中。因此快速灵敏诊断具有重要意义。本产品就是以探针法荧光定量 RT-PCR 技术为基础开发的专门检测副流感病毒的试剂盒,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供样品 RNA 模板。

2. 引物和探针经过优化,灵敏性高。

3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4.  特异性高,引物是根据副流感病毒高度保守区设计,不会跟其他病毒的 RNA 发生交叉反应。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。

6. 本产品只能用于科研。


【试剂组成】

成分

包装

2×Probe qPCR MagicMix

500μL(本色盖)

荧光 PCR 专用模板稀释液

1 mL(黄盖)

副流感病毒通用探针法 qRT-PCR 引物混合液

100 μL(白盖)

副流感病毒通用 qRT-PCR 探针

50 μL(棕色管)

副流感病毒通用探针法 qRT-PCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL)

50 μL(黄盖)

核酸释释剂(试用装)

20 次(1mL,绿盖)

使用手册

1 份

【储存条件及有效期】

低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。


【自备试剂】样品 DNA


【使用方法】

一、稀释标准曲线样品 10E2-10E7 拷贝/μL 6 10 倍稀释度为例

     1.    由于标准品浓度非常高因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,  本产品不提供活体样品做阳性对照只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

2.       用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 RT-PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同)。

7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震

1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4.       换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5.       换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

      6.       重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。


二、样品 RNA 的制备

7.       如果有 N 个样品,最好设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性

对照),一个是 NC(样品制备阴性对照。可以用 10μL 阳性对照的 10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为 NC

8.       用自选方法纯化样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。本试剂盒免费赠送 20RNA 提取的核酸释放剂试用装,该释放剂的裂解液可以直接作为RT-PCR 模板, 省略了 RNA 提取步骤。其使用手册可本公司客服索取。

三、Probe qRT-PCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)

9.       如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9PCR 管,其中 N+2用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于 PCR 阳性对照用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10.       在标记管中按下表加入各成分本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设

置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好  后最后加):


成分

样品管N+2 个

RT-PCR

阴性对照

标准曲线样品管

(2-7 管)

2×Probe qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

10 μL

副流感病毒通用 qRT-PCR 探针

1 μL

1 μL

2 μL

副流感病毒通用探针法qRT-PCR 引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

待测样品 RNA 模板

6 μL

-

-

超纯水

-

6 μL

-

7 步所得标准曲线样品稀释液

(2-7 号)

-

-

6μL2 样到 2 号管,3

号样到 3 号

管…)






11.  盖上盖子后上机,按下面参数进行 RT-PCR:

过程

温度

时间

逆转录

50℃

30 min

预变性

95℃

10 min

RT-PCR 反应

(40 个循环)

95℃

15 sec

60℃

1 min(采集 FAM 通道的荧光

信号)

五、数据处理

12.     如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品RNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。

13.     如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 40,则为阳性。


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