您好!欢迎访问优利科(上海)生命科学有限公司网站!
全国服务咨询热线:

15021281375

当前位置:首页 > 产品中心 > 科研试剂盒 > PCR试剂盒 > 艰难梭状芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

艰难梭状芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

简要描述:艰难梭状芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile)属厌氧性细菌,一般寄生在人的肠道内。

  • 更新时间:2024-04-16
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:83

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10380P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
英文名称Clostridium Difficile Probe PCR Kit保存条件低温运输,-20℃保存
有效期12个月试剂盒说明不同批号的试剂盒组分不可交互使用

艰难梭状芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒


商品名称:艰难梭状芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

Name     :Clostridium Difficile Probe PCR Kit

艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile)属厌氧性细菌,一般寄生在人的肠道内。如果过度服用某些抗生素,艰难梭菌的菌群生长速度加快,影响肠道中其他细菌,引发炎症。该细菌会引起伪膜性肠炎,临床表现为腹泻、腹痛、伴有全身中毒症状,症状突然开始,并伴随血压低,严重时能致死。通常还伴有发烧,白细胞增多,之后可导致死亡,是很严重的一类疾病。该细菌还会引起抗生素相关性腹泻,在体内的潜伏期为5-10天,之后导致大量的棕色或水状腹泻,持续1周左右。除上述疾病外,艰难梭菌尚可引起肾盂肾炎、脑膜炎、腹腔及阴道感染、菌血症和气性坏疽等。近年来该菌已成为医院内感染的病原菌之一,日益被人们所重视,因此快速检测艰难梭状芽孢杆菌具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术,本产品就是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测艰难梭状芽孢杆菌的试剂盒,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供样品DNA模板。

2. 引物和探针经过优化,灵敏性高。

3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4. 特异性高,引物是根据人艰难梭状芽孢杆菌高度保守的VP1区设计,不会跟其他微生物的DNA发生交叉反应。

5. 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

6. 本产品只能用于科研。


【试剂组成】

成分

十孔盒包装

2×Probe qPCR MagicMix

0.5 mL(本色盖)

荧光PCR专用模板稀释液

1 mL(黄盖)

艰难梭状芽孢杆菌PCR引物

100 μL(白盖)

艰难梭状芽孢杆菌qPCR探针

100 μL(棕色管)

艰难梭状芽孢杆菌阳性对照2.0

(1×10E8拷贝/μL)

50 μL(红盖)

DNA释放剂试用装

50次(试用装)

使用手册

1

【储存条件及有效期】

低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。


【自备试剂】样品 DNA


【使用方法】

一、稀释标准曲线样品(以10E2-10E7拷贝/μL610倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。

1.       标记6个离心管,分别为765432

2.      用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同)。

3.      7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

4.      换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

5.      换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

6.      重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品DNA的制备

7.      如果有N个样品,最好设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC

8.       用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA/提取试剂盒兼容。

三、Probe qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)

9.      如果只做1次重复,则标记N+9PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于标准曲线样品。

10.       在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加):

成分

样品管

N+2

PCR阴性对照管

标准曲线

样品管(2-7管)

2×Probe qPCR   MagicMix(本色盖)

10 μL

10 μL

10 μL

艰难梭状芽孢杆菌 qPCR探针(绿盖)

2 μL

2 μL

2 μL

艰难梭状芽孢杆菌 PCR引物混合液(白盖)

2 μL

2 μL

2 μL

待测样品DNA模板

6 μL

不加

不加

7步所得标准曲线样品稀释液(2-7号)

不加

不加

6μL2号样到2号管,3号样到3号管









11.     盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR:

过程

温度

时间

预变性

94℃

5 min

PCR反应

40个循环)

94℃

0.5 min

50

0.5 min(采集FAM通道的荧光信号)

72

0.5 min

最后延伸

72℃

10    min

五、数据处理

     12.     以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。

六、电泳检测

     13.      如果有必要电泳确认,可取10-20μL PCR产物直接在琼脂糖凝胶上电泳产物的大小为400 bp。但电泳非常容易污染实验环境,建议不轻易采纳。



产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
优利科(上海)生命科学有限公司
地址:金大公路8218号1幢
邮箱:1431486511@qq.com
传真:
关注我们
欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息:
欢迎您关注我们的微信公众号
了解更多信息