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非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

简要描述:非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus, ASFV)会引起非洲猪瘟等急性、出血性、烈性传染病。

  • 更新时间:2024-04-16
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:100

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10379P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
英文名称African Swine Fever Virus(ASFV) Probe PCR Kit保存条件低温运输,-20℃保存
有效期12个月试剂盒说明不同批号的试剂盒组分不可交互使用

非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒


商品名称:非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

Name     :African Swine Fever Virus(ASFV) Probe PCR Kit

非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus, ASFV)会引起非洲猪瘟等急性、出血性、烈性传染病,其特征是发病过程短,最急性和急性感染死亡率高达100%,临床表现为发热(达40~42℃),心跳加快,呼吸困难,部分咳嗽,眼、鼻有浆液性或粘液性脓性分泌物,皮肤发绀,淋巴结、肾、胃肠粘膜明显出血,非洲猪瘟临床症状与猪瘟症状相似,只能依靠实验室监测确诊,对养猪业造成严重损害,因此快速检测非洲猪瘟病毒具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术,本产品就是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测非洲猪瘟病毒的试剂盒,它具有下列特点:

1.即开即用,用户只需要提供样品DNA模板。

2.引物和探针经过优化,灵敏性高。

3.提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4.特异性高,引物是根据非洲猪瘟病毒高度保守区设计,不会跟其他病毒的DNA发生交叉反应。

5.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

6.本产品只能用于科研。


【试剂组成】

成分

十孔盒包装

2×Probe qPCR MagicMix

0.5 mL(本色盖)

荧光PCR专用模板稀释液

1 mL(黄盖)

非洲猪瘟病毒PCR引物

100 μL(白盖)

非洲猪瘟病毒qPCR探针

100 μL(棕色管)

非洲猪瘟病毒阳性对照2.0

(1×10E8拷贝/μL)

50 μL(红盖)

核酸释释剂试用装

50次(2.5mL

使用手册

1

【储存条件及有效期】

低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。


【自备试剂】样品 DNA


【使用方法】

一、稀释标准曲线样品(以10E2-10E7拷贝/μL610倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。

1.       标记6个离心管,分别为765432

2.      用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同)。

3.      7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

4.      换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

5.      换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

6.      重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品DNA的制备

7.       如果有N个样品,最好设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC

8.      用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA/提取试剂盒兼容。

三、Probe qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)

9.      如果只做1次重复,则标记N+9PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于标准曲线样品。

在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳

10.       性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加):

成分

样品管

N+2

PCR阴性对照管

标准曲线

样品管(2-7管)

2×Probe qPCR   MagicMix

10 μL

10 μL

10 μL

非洲猪瘟病毒 qPCR探针

2 μL

2 μL

2 μL

非洲猪瘟病毒 PCR引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

 待测样品DNA模板

6 μL

不加

不加

7步所得标准曲线样品稀释液(2-7号)

不加

不加

6μL2号样到2号管,3号样到3号管










11.     盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR:

过程

温度

时间

预变性

94℃

5 min

PCR反应

40个循环)

94℃

0.5 min

55

0.5 min(采集FAM通道的荧光信号)

72

0.5 min

最后延伸

72℃

10    min

四、数据处理

12.      如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。

       13.    如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。

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