您好!欢迎访问优利科(上海)生命科学有限公司网站!
全国服务咨询热线:

15021281375

当前位置:首页 > 产品中心 > 科研试剂盒 > PCR试剂盒 > 马梨形虫病(Piroplasmosis)PCR试剂盒

马梨形虫病(Piroplasmosis)PCR试剂盒

简要描述:马梨形虫病(Piroplasmosis)PCR试剂盒适用于马属动物(马、驴、骡和斑马)的马梨形虫病辅助诊断,其检测结果仅供参考。

  • 更新时间:2024-04-17
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:82

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10390P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
保存条件低温运输,-20℃保存有效期12个月
试剂盒说明不同批号的试剂盒组分不可交互使用

马梨形虫病(Piroplasmosis)PCR试剂盒


产品名称:马梨形虫病(Piroplasmosis)PCR试剂盒

英文名称:Diagnostic Kit for Piroplasmosis DNA(Real-Time PCR Method)

马梨形虫病是由马泰勒虫和驽巴贝斯虫寄生于马属动物(马、驴、骡和斑马)的红细胞内所引起的蜱传性血液原虫病。本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术,对马泰勒虫 18S 基因和驽巴贝斯虫 BC48 基因分别设计一对特异性引物和一条特异性探针,用荧光 PCR 技术对马梨形虫的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。


【试剂组成】

包装规格

50T/

Piroplasmosis 反应液

500μL×2

酶液

50μL×1

Piroplasmosis 阳性质控品

50μL ×1

阴性质控品

250μL ×1


【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 9 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

病死或扑杀动物的淋巴结或脾脏 2g;待检活动物,抽取全血 5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输, 严禁反复冻融。


【使用方法】

1.  样品处理(样本处理区)

1.1  样本前处理

组织样品:每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g,手术/剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中;咽/拭子样品直接取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。

1.2  核酸提取

推荐采用本公司生产的核酸提取/或纯化试剂(磁珠法或离心柱法)进行核酸提取,请按照试剂说明书进行操作。

2.  试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满

10 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

试剂

Piroplasmosis 反应液

酶液

用量(样本数为 N

20μL

1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21uL/管。

3.  加样(样本处理区)

将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀, 短暂离心。

4.  PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1  将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

4.2  设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;

荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye) FAM、VIC, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,请勿选择 ROX

参比荧光。

4.3  推荐循环参数设置:

 

步骤

循环数

温度

时间

收集荧光信号

1

1 cycle

95

10min

2

40 cycles

94

15sec

55

30sec

 



5.  结果分析判定

5.1  结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2  结果判断

FAM 通道为马泰勒虫检测结果,VIC 通道为驽巴贝斯虫检测结果。阳性:检测通道 Ct 值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;

可疑:检测通道 35<Ct 值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为 35<Ct 值≤38,且曲线有明显的增长曲线, 判定为阳性,否则为阴性;

阴性:样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。

6.  质控标准

阴性质控品:Ct>38 或无 Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

7.  检测方法的局限性

1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

3. 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

4. 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

5. 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

6. 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

7. 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

【注意事项】

1. 所有操作严格按照说明书进行;

2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,wan全混匀并短暂离心;

3. 反应液应避光保存;

4. 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
优利科(上海)生命科学有限公司
地址:金大公路8218号1幢
邮箱:1431486511@qq.com
传真:
关注我们
欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息:
欢迎您关注我们的微信公众号
了解更多信息