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鼠疫杆菌(YP)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法)

简要描述:鼠疫杆菌(YP)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法)鼠疫是由鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia Pestis, YP),简称鼠疫杆菌,引起危害人类健康的烈性传染病之一,具有传染性强、传播迅速、疫情严重、死亡率高等特点, 为国际检疫传染病。

  • 更新时间:2024-04-18
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:87

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10404P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
保存条件低温运输,-20℃保存有效期12个月
试剂盒说明不同批号的试剂盒组分不可交互使用

鼠疫杆菌(YP)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法)


产品名称:鼠疫杆菌(YP)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法)

英文名称:Yersinia Pestis Detection Kit (Real-Time PCR Method)

鼠疫是由鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia Pestis, YP),简称鼠疫杆菌,引起危害人类健康的烈性传染病之一,具有传染性强、传播迅速、疫情严重、死亡率高等特点, 为国际检疫传染病。

本试剂盒适用于检测动物腺、肝、脾、肺组织及人痰、血液等标本中分离出的鼠疫杆菌,用于鼠疫杆菌的辅助诊断。

本试剂盒采对鼠疫杆菌基因设计特异性的引物和探针,用荧光 PCR 技术对鼠疫杆菌的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

         

        

酶液

50μL×1   管

YP 反应液

1.0mL×1 管

YP 阳性质控品

50μL×1 管

阴性质控品

250μL×1   管

说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【运输及保存】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。


【注意事项】

1.  样品处理(样本处理区)

1.1  样本前处理

组织样品:称取组织样品约 0.5g,置于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,匀浆后取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中;

痰、尿液等液体样品:取 100μL 于灭菌离心管中;

血液样品:取抗凝血下层血细胞 50μL,加入 100μL 双蒸水吹匀。

1.2  DNA 提取

1)  对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液,100℃恒温处理 10min,13,000

rpm 离心 5min,取上清液转移至新的 1.5mL EP 管,-20℃保存;

2)  DNA 的提取也可以采用我公司生产的 DNA/提取试剂盒

(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。

2.  试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

试剂

YP 反应液

酶液

用量(样本数为   N)

20μL

1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21uL/管。

3.  加样(样本处理区)

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

4.  PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;


荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)

NONE,请勿选择 ROX 参比荧光。

1.1 推荐循环参数设置:

步骤

循环数

温度

时间

收集荧光信号

1

1 cycle

95℃

10min

2

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec




2.  结果分析判定

2.1  结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

2.2  结果判断

阳性:检测通道 Ct 值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线。

可疑:检测通道 Ct 值>35.0,且出现明显扩增曲线的样本建议重复试验,重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线者为阳性,否则为阴性。

阴性:样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。

3.  检测方法的局限性

Ø 样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

Ø 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

Ø 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

Ø 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

Ø 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

Ø 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果。

4.  质控标准

阴性质控品:无明显扩增曲线或无 Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

【注意事项】

Ø 所有操作严格按照说明书进行;

Ø 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,wan全混匀并短暂离心;

Ø 反应液应避光保存;

Ø 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

Ø 使用一次性吸头、一次性手套和各区与用工作服;

Ø 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

Ø 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

Ø 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

【参考文献】

[1]   国家质量监督检验检疫总局.SN/T 1280-2003 国境口岸鼠疫检验规程[S].北京:科学出版社, 2003.

[2]   张志凯, 海荣, 蔡虹, 等. 鼠疫耶尔森菌的多重 PCR 检测方法[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2007.

[3]   吉林省质量技术监督局. DB22/T 2081-2014 鼠疫耶尔森菌核酸的测定-荧光PCR 方法[S].

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