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水稻内源基因SPS核酸检测试剂盒

简要描述:水稻内源基因SPS核酸检测试剂盒用于检测转基因植物的SPS基因,用于筛查待检测植物中是否含有SPS成分。其检测结果仅供参考。

  • 更新时间:2024-04-19
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:63

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10407P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
保存条件低温运输,-20℃保存有效期12个月
试剂盒说明不同批号的试剂盒组分不可交互使用

水稻内源基因SPS核酸检测试剂盒


产品名称:水稻内源基因SPS核酸检测试剂盒

英文名称:Diagnostic Kit for SPS Gene DNA(Real-Time PCR Method)

本试剂盒适用于检测转基因植物的SPS基因,用于筛查待检测植物中是否含有SPS成分。其检测结果仅供参考。

本试剂盒用国家标准的SPS特异性引物和探针,用荧光PCR 技术进行转基因成分的检测。


【试剂组成】

     

       

酶液

50μL×1

SPS反应液

1.0mL×1

 SPS阳性质控品

50μL ×1

阴性质控品

250μL ×1

【运输及保存】

低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。


【适用仪器】

ABI 、安捷伦MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。

 

【标本采集】

称取200g样品。

 

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。


【注意事项】

1. 样品处理(样本处理区)

1.1 样本前处理

固体样本:用粉碎机或冷冻研磨仪将样品研磨至细粉状。

1.2 DNA提取

对于固体标本,DNA的提取可以采用SN/T 2584-2010中推荐的方法:

1) 每个样品取2个平行管。称取200mg粉碎的样品,加入1mL预冷至4℃的抽提液,剧烈摇动混匀后,在冰上静止5min,4℃条件下10000g离心15min,弃上清液;

2) 加入600uL预热至65℃的裂解液,充分重悬沉淀,在65℃恒温保持40min,期间颠倒混匀5次;

3) 室温条件下10000g离心10min,取上清液转移至新离心管中,加入5uLRNAseA,37℃恒温30min,分别用等体积苯/酚:异戊醇溶液和三氯jia烷:异戊醇溶液各抽提一次;

4) 室温条件下,10000g离心10min,取上清液至新离心管,加入三分之二体积的异丙醇,十分之一体积的3mol/L的乙酸钠溶液(pH=6.5),-20℃放置2-3h;

5) 在4℃条件下,10000g离心15min,弃上清液,用70%乙醇洗涤沉淀一次,倒出乙醇,晾干沉淀;

6) 加入50uL TE(pH8.0)溶解沉淀,所得溶解即为样品DNA溶液。

也可使用等效的DNA/提取试剂盒。

油脂样本请直接选用市售油脂DNA/提取试剂盒,按说明操作。

 

2. 试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照;样品每满7份,多配制1份),每测试反应体系配制如下表:

试剂

 SPS反应液

酶液

用量

20μL

1μL

 



3. 加样(样本处理区)

将步骤1提取的DNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μL,加入相应的

反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

4. PCR扩增(核酸扩增区)

4.1将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内;

4.2设置好通道、样品信息,反应体系设置为25ul;荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)选择NONE,请勿选择ROX参比荧光。

4.3推荐循环参数设置:

步骤

循环数

温度

时间

收集荧光信号

1

1 cycle

95

10min

2

40 cycles

94

15sec

55

30sec

 





5. 结果分析判定

5.1 结果分析条件设定

设置Baseline和Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节),以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2 结果判断

阳性:检测通道Ct值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;
可疑:检测通道35<Ct值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为35<Ct值≤38,且曲线有明显的增长曲线,判定为阳性,否则为阴性;
阴性:样本检测结果Ct值>38或无Ct值。

 

6. 检测方法的局限性

样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

 

7. 质控标准

阴性质控品:Ct>38或无Ct值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且Ct值≤32;

以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

 

【注意事项】

1.所有操作严格按照说明书进行;

2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化,wan全混匀并短暂离心;

3.反应液应避光保存;

4.反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

7.实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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