免疫组化问题解答

2023-04-03 一.染色过强原因解决方法1.抗体浓度过高或孵育时间过长降低抗体滴度、抗体孵育时间：室温1小时或4度过夜2.孵育温度过高超过37度一般在室温20-28度cDAB显色时间过长或浓度过高显色时间不超过5-12分钟，以显微镜下观察为准。二.非特异性背景染色原因解决方法1.操作过程中冲洗不充分每步冲洗3次每次5分钟2.组织中含过氧化物酶未阻断可再配置新鲜3%H2O2封闭孵育时间延长3.组织中含内原性生物素正常非免疫动物血清再封闭4.血清蛋白封闭不充分延长血清蛋白封闭时间。三.染色弱原因...

细胞株和菌株【猪静脉血管内皮细胞】注意事项

2023-03-29 细胞株和菌株【猪静脉血管内皮细胞】注意事项：1.实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminarflow)以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。2.无菌操作工作区域应保...

荧光PCR检测试剂盒常常需要精细操作

2023-03-15 荧光PCR检测试剂盒是一种常用的分子生物学实验工具，被广泛应用于医学、生物学、环境科学、农业等领域。其作用是在PCR（聚合酶链式反应）过程中通过荧光信号检测DNA序列特定变化，检验目标DNA是否存在、是否出现特定变异或突变等。工作原理：PCR是一种在体外以无细胞为基础的DNA复制技术，包括DNA的两个变性、引物、扩增和DNA的再生。PCR检测试剂盒的工作原理基本上是利用PCR技术，通过引入荧光标记物或探针来检测PCR产物，转化DNA目标序列的检测结果为荧光信号。荧光PCR检测...

实验室常用的保菌方法

2023-03-11 菌种保藏是指保持微生物菌株的活力和遗传性状的技术。微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚至死亡，因而常常造成菌种的衰退。菌种保藏的目的就是使菌株存活、不丢失、不污染杂菌、不发生或少发生变异，保持菌种原有的活性和各种特征。菌种保藏的基本原理是使微生物的生命活动处于半永jiu性的休眠状态，也就是将微生物的新陈代谢作用限制在最di范围内。实验室常用的保菌方法有：甘油保菌法、斜面保菌法、穿刺保菌法、液体石蜡覆盖保藏法、沙土保藏法、冷冻干燥法。微基生物在以上几种菌种保藏方法的基础...

PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成

2023-03-02 人乳清蛋白(hLALBA)转基因荧光PCR试剂盒适用于检测气管分泌物拭子、肺组织等样本中的人乳清蛋白(hLALBA)转基因，用于人乳清蛋白(hLALBA)转基因感染的辅助诊断，其检测结果仅供参考。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应做准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至...

细胞复苏、传代与冻存操作流程

2023-03-02 细胞复苏、传代与冻存操作流程仪器与试剂仪器试剂耗材离心机胎牛血清（FBS）离心管（15ml、50ml）生物安全柜无菌1×PBSpH=7.2T-25细胞培养瓶电动移液器0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA一次性无菌移液管（2ml、5ml、10ml）CO2培养箱wan全培养基（含血清）1.8mL冻存管倒置显微镜液氮罐冻存液：90%FBS+10%DMSO异丙醇程序降温盒恒温水浴锅超低温冰箱护目镜、厚毛线手套等操作流程复苏1）将恒温水浴锅中的水预热到37℃；2）准备一支15ml离心...

菌种培养过程中需要注意哪些

2023-02-08 菌种保存条件：斜面、穿刺菌和冻干粉应在4-10度保存，甘油菌在-80度保存。菌种培养条件：模式菌株：是培养温度：37℃培养时间：24-48h需氧类型：5%二氧化碳生物安全级别：二级菌种培养注意事项：1、微生物菌种应保存于低温、清洁和干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；2、菌种操作在无菌条件下进行，接种完毕应该灭菌再做丢弃处理；3、斜面菌种和穿刺菌种保存时间通常为3-6个月，应根据菌种状况及时结转；冻干粉保存时间通常是2-25年；甘油菌保存时间为2-5年；4、冻干首-次...

何为PCR技术？

2023-01-06 PCR技术，即聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）是由美国PECetus公司的KaryMullis在1983年（1993年获诺贝尔化学奖）建立的。这项技术可在试管内的经数小时反应就将特定的DNA片段扩增数百万倍，这种迅速获取大量单一核酸片段的技术在分子生物学研究中具有举足轻重的意义，推动了生命科学的研究进展。它不仅是DNA分析常用的技术，而且在DNA重组与表达、基因结构分析和功能检测中具有重要的应用价值。PCR可以被认为是与发生在细胞内的DN...